Разработка и применение метода рвПЦР для анализа остаточной ДНК штамма-продуцента в субстанции гистона Н1.3

Аннотация:

В данной работе предлагается количественный метод ПЦР в реальном времени (рвПЦР) с использованием специфических праймеров к фрагменту гена 16S РНК Е. coli применить для определения остаточной ДНК штамма-продуцента Е. coli BL21(DE3)/prhH 1.3 в активной фармацевтической субстанции (АФС) рекомбинантного человеческого гистона HI.3. Проведена оптимизация пробоподготовки, создан рабочий стандартный образец на основе ДНК штамма-продуцента, обработанной ультразвуком, подобран ампликон для рвПЦР. Оценена специфичность разработанных праймеров в сравнении с ДНК эукариот. Проведен анализ эффективности метода в сравнении с коммерческим набором. Разработанные праймеры к гену 16S РНК оказались в 30 раз чувствительнее праймеров референсного коммерческого набора. Гистон Н1.3 относится к семейству высококонсервативных основных белков и проявляет способность внеклеточно и селективно связываться с фосфолипидами мембран лимфоидных клеток; на этом свойстве основано его противоопухолевое действие. Поскольку гистоны являются собственными белками человеческого организма, они в отличие от аналогичных по эффекту моноклональных антител не обладают иммуногенностью, что особенно актуально при разработке более совершенных и безопасных лекарственных форм. Количество ДНК в АФС, предназначенных для производства инъекционных препаратов, не должно превышать 10 нг на терапевтическую дозу, согласно требованиям международных руководств. Для АФС рекомбинантного гистона человека HI.3 это значение составляет не более 5 пг ДНК на 1 мг сухого вещества (5 ppb).

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2015
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2015.-N 2.-С.65-75. Библ. 10 назв.
Просмотров: 47