ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫЙ ГЛИКОМНЫЙ АНАЛИЗ: ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОБОПОДГОТОВКИ

Аннотация:

Известно, что гликозилирование влияет на структуру, фолдинг и функцию множества белков, а нарушения гликозилирования связаны с различными заболеваниями. Разработано множество методов анализа глика-нов в составе иммуноглобулинов (в основном lgG), однако анализ гликанов суммарных белков плазмы крови развит гораздо меньше из-за дополнительных проблем, возникающих вследствие большей сложности образца. В настоящей работе мы описываем разработку и оптимизацию высокоэффективного метода про-боподготовки для анализа N-гликанов белков плазмы с помощью разновидности жидкостной хроматографии H1LIC в ее сверхвысокоэффективном варианте (HILIC—UPLC). Было показано, что основным источником вариативности является стадия очистки меченых гликанов; для лучшей воспроизводимости мы протестировали целлюлозу, силикагель, биогель и гидрофильный GHP-фильтр в качестве неподвижной фазы для твердофазной экстракции. Было показано, что все они подходят для очистки меченых гликанов, однако метод с использованием планшетного фильтра GHP и холодного 96%-ного ACN более удобен и обеспечивает наиболее высокую воспроизводимость. Метод был дополнительно оптимизирован с использованием скрининга Плакетта—Бермана и валидирован в отношении анализа вариативности основных шагов, а также вариативности по дням и исполнителям. Разработанный метод является быстрым, экономичным и удобным в использовании, обладает хорошей воспроизводимостью и позволяет оценивать разнообразие N-гликома плазмы стабильно на протяжении длительных периодов времени.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2015
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2015.-N 7.-С.1109-1118. Библ. 12 назв.
Просмотров: 28