ИСКУССТВЕННЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ КАРБАРИЛА, СОЗДАННЫЕ НА ОСНОВЕ ОДНОЦЕПОЧЕЧНОГО ВАРИАБЕЛЬНОГО ФРАГМЕНТА (scFv): ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С АНТИГЕНОМ

Аннотация:

Карбарил — инсектицид (низкомолекулярное соединение), ингибирующий холинэстеразу насекомых. Присутствие остаточного количества карбарила в пище и окружающей среде наносит вред здоровью людей. Высокоспецифические scFv мини-антитела, с помощью которых можно было бы идентифицировать карбарил, пока не созданы. В представленной работе сконструировали ген, кодирующий антикарбариловые scFv мини-антитела. Предварительно были клонированы гены VL и VH, кодирующие вариабельные районы молекул иммуноглобулинов, из генома гибридных клеток (гибридом) мышей, секретирующих моноклональные антитела против карбарила. Далее эти гены были объединены между собой ПЦР методом сплайсинга перекрывающимися расширениями последовательностью, кодирующей гибкий олигопептидный линкер (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3. Сконструированная после этого рекомбинант-ная плазмида (scFv-pET-26b) была экспрессирована в клетках Е. coli BL21. Экспрессию рекомбинантного белка проверяли методом Ds-Na-ПААГ электрофореза и иммуноферментного анализа (ИФА). Построена компьютерная модель трехмерной структуры антикарбарил scFv мини-антитела, и путем молекулярного докинга была смоделирована структура комплекса карбарила с мини-антителом. При анализе модели установлено, что карбарил-связывающий участок образован следующими аминокислотными остатками: А1а51, Ser52, 11е51, Gly54, Ser56, Arg98 и GlylOO. Дальнейшее изучение этой модели может помочь установлению механизма взаимодействия карбарила с его специфическими антителами. Кроме того, эта модель может служить целям in vitro повышения аффинности антител к карбарилу.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2015
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2015.-N 8.-С.1262-1271. Библ. 16 назв.
Просмотров: 38