ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ПРЕДОБРАБОТКИ ПРЕПАРАТОВ НА ВЫЯВЛЕНИЕ 5-МЕТИЛЦИТОЗИНА В МЕТАФАЗНЫХ ХРОМОСОМАХ И ИНТЕРФАЗНЫХ ЯДРАХ IN SITU

Аннотация:

Качественный и количественный анализ метилирования ДНК in situ на уровне клетки, хромосомы и хромосомного домена крайне важен для диагностики и лечения различных заболеваний, изучения старения и последствий воздействия окружающей среды. При этом вопрос о том, насколько выявляемые in situ закономерности метилирования обусловлены собственно метилированием ДНК per se или (и) доступностью ДНК для антител, зависящей от особенностей структуры хроматина и конденсации хромосом, остается открытым. Указанные явления могут вести к неправильной оценке собственно паттерна метилирования ДНК. Чтобы избавиться, насколько возможно, от этого недостатка, мы модифицировали наиболее широко используемый метод выявления метилцитозина in situ с помощью моноклональных антител. В настоящей работе мы показали, что мечение 5-метилцитозина в центромерном гетерохрома-тине, хромосомных плечах и сестринских хроматидах при иммунохимическом исследовании с помощью флуоресцентных антител в значительной степени зависит от условий предобработки препаратов хромосом. На недифференцированных клетках эмбриональной тератокарциномы мыши линии F9 обнаружено, что изменение условий хранения препаратов ведет к резкому уменьшению, вплоть до исчезновения, интенсивности флуоресценции сигнала в центромерном гетерохроматине. С помощью описанного в работе метода на хромосомах клеток F9 и лимфоцитов периферической крови человека впервые было обнаружено наличие асимметрии метилирования сестринских хроматид. Это может приводить к асимметрическим клеточным делениям и асимметричному транскрипционному статусу дочерних клеток. Предлагаемые модификации метода выявления 5-метилцитозина in situ позволяют получить более полную характеристику метилирования хромосом и хромосомных участков.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2015
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2015.-N 8.-С.592-601. Библ. 40 назв.
Просмотров: 29