ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНОЙ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ Deinococcus radiodurans*

Аннотация:

Радиорезистентная бактерия Deinococcus radiodurans является одной из самых интересных моделей для изучения стрессоустойчивости клеток. Исследования механизмов регуляции экспрессии генов у D. radiodurans выявили ряд особенностей транскрипционного аппарата, которые могут играть роль в устойчивости клеток к ДНК-повреждающим воздействиям. В частности, РНК полимераза D. radiodurans образует нестабильные промоторные комплексы, а на стадии элонгации транскрипции способна с гораздо большей скоростью расщеплять РНК-транскрипт, чем РНК-полимераза Escherichia coli. Исследования структуры и функций РНК-полимеразы D. radiodurans затруднены в связи с отсутствием удобной генетической системы для получения мутаций в генах РНК-полимеразы и сложностью выделения фермента. В данной работе создана система для экспрессии РН К-полимеразы D. radiodurans в клетках Е. coli. Получен экспрессионный вектор, содержащий гены всех субъединиц кор-фермента данной РНК-полимеразы, подобраны условия экспрессии и выделения белка, свободного от примесей. Установлено, что РНК-полимераза D. radiodurans обладает повышенной скоростью расщепления РНК по сравнению с ферментом Е. coli в широком диапазоне условий, в т.ч. при различных концентрациях ионов магния и рН реакционного буфера. Разработанная экспрессионная система может быть использована для изучения особенностей реакции расщепления РНК и механизмов регуляции транскрипции у D. radiodurans, в т.ч. с использованием мутантных вариантов РНК-полимеразы.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2015
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2015.-N 10.-С.1542-1550. Библ. 33 назв.
Просмотров: 81