УКОРОЧЕННЫЕ ВАРИАНТЫ ОЛИГОПЕПТИДAЗЫ В ИЗ Serratia proteamaculans С ИЗМЕНЕННОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Аннотация:

Было установлено, что в присутствии 50%-ного глицерина обработка нативной психрофильной олигопептидазы В из Serratia proteamaculans (PSP, 78 кДа) растворимым или иммобилизованным на модифицированном кремнеземе MPG-PA химотрипсином приводит к образованию укороченной формы фермента (PSP-Chtr, -66 кДа), которая сохраняет активность в отношении низкомолекулярного субстрата PSP — BAPNA и, в отличие от PSP, активна в отношении белкового субстрата — азоказеина. С помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF было установлено, что в PSP-Chtr отсутствует N-концевая область молекулы, которая, предположительно, препятствует гидролизу высокомолекулярных субстратов. Кроме того, было установлено, что отсутствующий в PSP-Chtr фрагмент соответствует N-концевому элементу информационной структуры высшего ранга PSP, что подтверждает применимость метода анализа информационной структуры для белковой инженерии ферментов. Аналогичная обработка PSP иммобилизованным трипсином также приводила к образованию стабильной укороченной формы фермента (PSP-Тr, ~75 кДа), в которой отсутствовали 22 С-концевых аминокислотных остатка и которая полностью утрачивала ферментативную активность, предположительно, по причине изменения окружения His652 каталитической триады.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2015
Объем: 15с.
Дополнительная информация: 2015.-N 11.-С.1741-1755. Библ. 27 назв.
Просмотров: 31