Оценка эффективности промоторов Corynebacterium glutamicum и их использование для усиления активности генов у лизин-продуцирующих бактерий

Аннотация:

На основе репликативного вектора pNS2 и репортерного гена cat из транспозона Тп9, кодирующего хлорамфениколацетилтрансферазу, сконструирован вектор pNS-cat72 для клонирования промоторов разных генов и оценки их силы по устойчивости к хлорамфениколу в клетках штаммов Corynebacterium glutamicum. С помощью этого вектора изучена сила промоторов различных генов у штамма Corynebacterium glutamicum GEN1-2 (lystA279T- SI7A), содержащего аспартокиназу, устойчивую к ретроингибированию лизином и треонином. Обнаружено, что промоторы генов eftu, sod, cspB и leuC обеспечивают более высокий уровень устойчивости к хлорамфениколу, чем промоторы генов lysC,pyc, tkt,fbp, вовлеченных в контроль биосинтеза лизина. Показано, что замена собственного промотора гена ddh на промотор sod увеличивает уровень транскрипции почти в 10 раз, при этом активность фермента диаминопимелатдегидрогеназы усиливается в 3—А раза, что приводит к увеличению продукции лизина клетками на 9%. Охарактеризованный набор промоторов разной силы является необходимым инструментом для оптимизации работы генов при конструировании штаммов-продуцентов клеточных метаболитов.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2015
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2015.-N 6.-С.16-24. Библ. 12 назв.
Просмотров: 51