АНАЛИЗ EST, ИДЕНТИФИКАЦИЯ ГЕНОВ ГУСЕОБРАЗНЫХ, КОДИРУЮЩИХ ТРИПСИН, НА ОСНОВЕ БИБЛИОТЕКИ ПОЛНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ кДНК УТКИ (Anas platyrhynchos) И ИХ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

Аннотация:

Трипсины представляют собой ключевые белки, участвующие в процессах переваривания белков в клетках животных путем разрушения пептидных связей, образованных карбоксильной группой остатков лизина и аргинина. Они широко используются в различных биотехнологических процессах. В настоящей работе была создана библиотека полноцепочечных кДНК с емкостью 5 х 10 в 5 степени cfu/мл из утки (Anasplatyrhynchos). Гены, кодирующие трипсин, идентифицированы путем секвенирования EST и затем с помощью RACE-ПЦР были получены две полноцепочечные кДНК, которые, как показано, кодируют сигнальный пептид, активационный пептид и зрелый белок, состоящий из 223 аминокислотных остатков. Два зрелых белка, чья аминокислотная последовательность была предсказана на основе кДНК, были обозначены как трипсин-IAP и трипсин-IIAP, и теоретические значения их изоэлектрических точек (р/) и молекулярного веса (MW) были равны 7,99/23466,4 дальтон и 4,65/24066,0 дальтон соответственно. Гены трипсина также были детально охарактеризованы с помощью методов биоинформатического анализа. В результате филогенетического анализа было показано, что трипсин-IIAP имел определенное преимущество перед трипсином-1АР. Затем трипсин-IIАР утки был экспрессирован в Escherichia coli и были определены его кинетические параметры. С помощью моделирования по гомологии были предсказаны трехмерные структуры трипсин-IAP и трипсин-IIAP и определены консервативные аминокислотные остатки, определяющие функциональные свойства этих белков. Обнаружено, что две петли, контролирующие специфичность действия трипсина, и субстрат-связывающий карман почти идентичны по первичной последовательности и пространственной структуре в семействах трипсинов.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2016
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2016.-N 2.-С.251-264. Библ. 31 назв.
Просмотров: 55