ВЛИЯНИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ G НА СТАБИЛЬНОСТЬ ЭКЗОГЕННОЙ ДНК В КЛЕТКАХ HeLa

Аннотация:

Эндонуклеаза G (EndoG) — это высоко консервативная митохондриально-ядерная нуклеаза, играющая как летальную, так и жизненно важную роль в клетке. Целью данной работы явилась проверка, проявляет ли EndoG свою нуклеазную активность по отношению к ДНК-субстрату, такому как экзогенная плазмидная ДНК (рДНК), с точки зрения выяснения важности этого фермента для использования в генной терапии. Изучено влияние «нокдауна» EndoG на стабильность рДНК и экспрессию кодируемого ею репортерного гена зеленого флуоресцирующего белка (GFP) при использовании клеток карциномы шейки матки человека линии HeLa. Показано, что после трансфекции в клетки HeLa векторных рДНК, кодирующих специфические короткие шпилечные РНК (shРНК), наблюдалось снижение уровней EndoG мРНК внутри этих клеток. В физиологических условиях такой «нокдаун» EndoG не влиял ни на стабильность рДНК, ни на уровни экспрессии кодируемого ею репортерного гена в течение четырех дней наблюдения. Но, если экспрессия эндогенной EndoG увеличивалась благодаря влиянию внешних факторов, «нокдаун» EndoG под действием специфичных shPHK повышал как стабильность, так и трансгенную экспрессию векторных рДНК. Таким образом, EndoG не опосредует специфическое разрушение именно экзогенной ДНК, однако в нефизиологических условиях этот фермент может расщеплять внутриклеточную ДНК неспецифически и независимо от ее источника. Мы не считаем, что блокирование EndoG является подходящей стратегией для увеличения уровня и продолжительности кратковременной экспрессии трансгенов, переносимых невирусными векторными ДНК, используемыми в генной терапии.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2016
Объем: 17с.
Дополнительная информация: 2016.-N 2.-С.265-281. Библ. 53 назв.
Просмотров: 50