Экспериментальное исследование индукции гуморального ответа на синтетический мультимерный пептидный антиген, потенциально имитирующий конформационный эпитоп нейтрализации ВИЧ-1

Аннотация:

Цель исследования — исследование возможности получения антител против линейного синтетического пептида, состоящего из повторов 3-аминокислотного эпитопа, потенциально имитирующего конформационный эпитоп нейтрализации ВИЧ-1 — NEQ (аспарагин, глутамин, глутамат). Наша авторская идея состояла в мультипликации такого 3-аминокислотного эпитопа в 15-аминокислотном линейном синтетическом пептиде (NEQ)5. Пептид был синтезирован в компании Biopeptide Co. (USA). Степень очистки искомого продукта составляла 95%. Для создания иммуногенного препарата данный пептид ковалентно конъюгировали с высокомолекулярным пептидогликаном растительного происхождения Иммуномаксом ТМ отечественного производства в качестве иммуноадъюванта. Сшивающим агентом служил реагент SMCC ( сукцинимидил - 4 - (N - малеимидометил) - циклогексан -1 - карбоксилат). Искомый продукт выделяли на колонке Zeba® Desalt Spin Columns. Полученным конъюгатом иммунизировали двухмесячных мышей-самок (СВА х C57B1)F1. Иммунизацию производили трижды с интервалами в 30—45 сут. Все манипуляции с животными выполняли по стандартам SOP. Наличие антипептидных антител и их титр в сыворотках крови мышей оценивали методом ИФА. Оценивали также in vivo влияние внутрибрюшинного введения чистого адъюванта на транскрипцию информационной РНК первичного провоспалительного цитокина TNF в клетках перитонеального экссудата. Исследования проводили методом ПЦР в динамике, начиная с 30 мин до 48 ч после введения препарата. Взаимодействие полученных антипептидных антител с репликационно способным ВИЧ-1 оценивали в заражаемой культуре клеток МТ4 по уровню вирусного белка р24 в супернатанте. Последний измеряли в указанные сроки методом ИФА в тест-системе «Вектор бест». Результаты. Пептид в чистом виде при введении in vivo мышам не индуцировал биосинтез антител в определяемых количествах. При иммунизации мышей конъюгатом пептида с Иммуномаксом™ титры антипептидных антител составляли 10. Иммуномакс ТМ сам по себе при введении in vivo индуцировал транскрипцию иРНК TNF импульсно: в одном опыте в течении шестого часа, в другом — восьмого часа, без реактивации транскрипции в более поздние сроки. При добавлении антипептидной сыворотки в разведении 1/10 в культуру клеток МТ4, инфицированных изолятом ВИЧ-1/ШВ, выявлена нейтрализация репликации вируса примерно на 90%. В больших разведениях эффект нейтрализации отсутствовал. Та же антипептидная сыворотка в отношении другого изолята ВИЧ-1/899 в культуре тех же клеток МТ4 в разведении 1/20 усиливала репликацию вируса, что было воспроизведено в четырех повторных опытах. Реакции пептида с глутаматным рецептором мозга в ИФА тест-системе зарегистрировано не было. Заключение. Синтетический пептид — мульти-мер триплета (NEQ)5, ковалентно конъюгированный с растительным пептидогликаном Иммуномакс ТМ в качестве адъюванта, индуцирует антительный ответ у мышей в титрах 10 в степени 5-6, по данным ИФА. Введение мышам чистого адъюванта в той же дозе индуцирует в клетках перитонеального экссудата импульсную транскрипцию иРНК первичного провоспалительного цитокина TNF в течение 6-го или 8-го часа после введения препарата. В культуре клеток МТ4 антипептидная сыворотка в малых разведениях проявляла вирус-нейтрализующую активность в отношении изолята ВИЧ-1/IIIВ, но усиливала репликацию в тех же клетках другого изолята ВИЧ-1/899. Такое расхождение результатов — нейтрализация вирусной инфекции или усиление инфекции — объясняет одну из трудностей при разработке анти-ВИЧ вакцин. Ключевые слова: ВИЧ-1, синтетический пептидный антиген (NEQ)5, иммуноадъювант Иммуномакс , ВИЧ-1/IIIВ-нейтрализация, ВИЧ-1/899 усиление инфекции

Авторы:

Издание: Патологическая физиология и экспериментальная терапия
Год издания: 2016
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2016.-N 2.-С.24-28. Библ. 8 назв.
Просмотров: 43