ВЕЗИКУЛЫ, НЕСУЩИЕ ЕЕА1, НЕ ЯВЛЯЮТСЯ АУТОФАГОСОМАМИ В КЛЕТКАХ HeLa, КУЛЬТИВИРУЕМЫХ В УСЛОВИЯХ СЫВОРОТОЧНОГО ГОЛОДАНИЯ

Аннотация:

В соответствии с современной моделью, стимуляция эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов приводит к рекрутированию на ранние эндосомы цитоплазматического заякоривающего белка ЕЕА1, необходимого для их дальнейшего слияния. Однако EEAl-позитивные везикулы выявляются и в не стимулированных ростовым фактором клетках, инкубировавшихся в условиях лишения сыворотки. Известно также, что длительное сывороточное голодание индуцирует в клетках образование аутофагосом, в котором могут принимать участие и компартменты эндоцитозного пути. Чтобы проверить, не являются ли ЕЕА1-везикулы, выявляемые в клетках в условиях сывороточного голодания, аутофагосомами, мы исследовали динамику изменения количества и средних размеров ЕЕА1- и LСЗ-положительных везикул, а также оценили колокализацию белка ЕЕА1 с маркером аутофагосом LC3 в клетках HeLa, культивируемых в течение 12—36 ч в среде с дефицитом компонентов сыворотки. Оказалось, что количество аутофагосом в среднем гораздо меньше числа ЕЕА1-везикул на клетку. Показано, что индукция голодания приводила к увеличению лишь среднего размера аутофагосом, в то время как количество и средний размер ЕЕА1-везикул не изменялись. Колокализация белков ЕЕА1 и LC3 в клетках, культивируемых в бессывороточных условиях в течение 12—18 ч, была очень низкой и незначительно возрастала к 36 ч. Блокирование биосинтетического пути с помощью брефельдина А, вызывающего разборку аппарата Гольджи, приводило к уменьшению числа и увеличению среднего размера ЕЕА1-везикул, а также увеличению среднего размера LСЗ-везикул и усилению их колокализации с ЕЕА1. Таким образом, большинство ЕЕА1-везикул, присутствующих в клетках, культивируемых в условиях сывороточного голодания, не являются аутофагосомами. Более выраженный эффект брефельдина А указывает на то, что он, по-видимому, является более сильным фактором стресса по сравнению с лишением сыворотки, а также позволяет предполагать существенную роль биосинтетического пути в биогенезе ЕЕА1 -везикул.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2016
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2016.-N 5.-С.370-377. Библ. 22 назв.
Просмотров: 48