ПОВЫШЕНИЕ АКТИВНОСТИ р72 ВЫЗЫВАЕТ УСИЛЕНИЕ МИГРАЦИИ И ИНВАЗИИ КЛЕТОК ГЛИОМЫ В РЕЗУЛЬТАТЕ ПОДАВЛЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА Beclin 1

Аннотация:

Белок р72 относится к РНК-хеликазам, которые содержат аминокислотную последовательность. Называемую DEAD-бокс. Ферменты этого семейства способны раскручивать двойную цепь РНК и эффективны в процессинге микроРНК (miRNA, miR). Однако их роль в развитии глиомы до сих пор остается неизвестной. В настоящей работе с помощью Вестерн-блоттинга было исследовано влияние экспрессии р72 в прог-рессировании глиомы. С этой целью в клетки AI72 и T98G был введен аденовирус, ингибирующий ген, кодирующий р72. Аутофагию клеток оценивали путем подсчета пятен GFP-LC3, а апоптоз клеток определяли методом проточной цитофлуориметрии. Влияние гена Beclinl изучали с помощью подсчета пятен GFP-LC3, проточной цитофлуориметрии и колонеобразования. МикроРНК, нацеленные на З'-нетранслируемый участок (З'-UTR — З'-untranslated region) гена Beclinl, были предсказаны с помощью программы TargetScan. Двойной тест репортерного гена люциферазы был использован для определения связывания этих микроРНК с 3'UTR гена Beclinl. Экспрессия р72 была значительно повышена в линиях клеток и тканях глиомы. Обнаружено, что при ингибировании р72 происходит значительное усиление экспрессии ассоциированного с аутофагией белка беклин!. Накопление пятен GFP-LC3 было значительным в клетках, подвергнутых трансфекции ad-sh-p72, в сравнении клетками, трансфицированными ad-con. Показано, что способность образовывать колонии и интенсивность апоптоза клеток снижаются при ингибировании гена р72. Более того, повышение экспрессии гена Beclinl вносит вклад в процесс аутофагии клеток А172, их инвазию и апоптоз. Повышенная экспрессия генар 72 индуцирует экспрессию miR-34-5p и miR-5195-Зр в клетках А172 и T98G. Показано, что ген Beclinl является геном-мишенью для действия miR-34-5p и miR-5195-Зр. Таким образом, впервые показано, что гиперэкспрессия р72 снижает экспрессию гена Beclinl, частично, за.счет экспрессии miR-34-5p и miR-5195-Зр в клетках AI72 и T98G. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: глиома, р72, miR-34-5p, miR-5195-Зр, Beclin I.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2016
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2016.-N 6.-С.754-763. Библ. 37 назв.
Просмотров: 36