ОПТИМИЗАЦИЯ ТЕХНОЛОГИИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ДЕРМАЛЬНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ ДЛЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ЦЕЛЕЙ С ПОМОЩЬЮ РОБОТИЗИРОВАННОЙ СТАНЦИИ

Аннотация:

Возможности роботизированной станции по культивированию и пересеву клеточных линий CompacT SelecT [ТАР Biosystems, Великобритания) позволяют использовать ее для экспансии дермальных фибробластов, показанных для клинического применения. Автоматизация культивирования клеток требует оптимизации этого процесса, в том числе подбора наиболее подходящей исходной дозы фибробластов и определения времени достижения клеточным монослоем оптимальной плотности для пересева. Цель работы — определение оптимальных параметров пассирования дермальных фибробластов для стандартизации протокола их автоматизированного культивирования с помощью роботизированной станции CompacT SelecT. Дермальные фибробласты человека были получены из фрагментов кожи доноров методом ферментативной диссоциации. В качестве показателя пролиферативной активности использовали индекс пролиферации. Изменение скорости пролиферации в зависимости от плотности клеточного монослоя определяли по среднесуточному количеству делений на одну клетку. Влияние посевной дозы Сот 50 до 1,2x104 кл/см2) на пролиферативную активность фибробластов оценивали в разные сроки эксперимента [3, 5, 7 и 9 сут. культивирования]. Была установлена обратная зависимость пролиферативной активности фибробластов от величины посевной дозы и показано резкое снижение скорости пролиферации фибробластов после достижения клеточным монослоем плотности 3,5—4,5x104 кл/см2. В результате проведенного исследования было обнаружено, что оптимальная исходная доза фибробластов составляет 3x103 кп/см2, а наиболее подходящая для проведения дальнейшего пересева плотность монослоя — 3,5x104 кл/см2. В посевах с высокой исходной плотностью С1,2х104 кл/см2) при достижении клеточным монослоем критической плотности на 7 сут. наблюдалась гибель части клеток, что сопровождалось возобновлением роста клеточной популяции на Э сут. культивирования. Данный феномен может объясняться селекцией клеток, способных существовать в условиях повышенной плотности монослоя.

Авторы:

Издание: Гены @ Клетки
Год издания: 2016
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2016.-N 3.-С.108-112. Библ. 13 назв.
Просмотров: 31