ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА НЕИММОРТАЛИЗОВАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ ДЕРМАЛЬНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ КОЖИ ВЕК ВЗРОСЛЫХ ДОНОРОВ РАЗНОГО ВОЗРАСТА

Аннотация:

Получены новые неиммортализованные клеточные линии человека из кожи век трех взрослых доноров в возрасте 37, 45 и 53 года, названные DF-1, DF-2 и DF-3 соответственно. Проведен сравнительный анализ ростовых характеристик и дифференцировочного потенциала этих линий и подтвержден их статус как линий мезенхимных стволовых клеток. Основные характеристики получены на 6-м пассаже. Среднее время удвоения клеточных популяций составляет 40, 35 и 33 ч для линий DF-1, DF-2 и DF-3 соответственно. Наблюдаемые различия по ростовым характеристикам клеточных линий не отражают возрастной зависимости, т. е. увеличения среднего времени удвоения с увеличением возраста от 37 до 53 лет, а, скорее, могут быть связаны с генетическими особенностями доноров. Кривые роста свидетельствуют об активной пролиферации всех линий. Эффективность клонирования невысокая, но одинаковая для всех линий. Вступление клеток в фазу репликативного старения наблюдается на 25-м пассаже, что составляет более 50 удвоений клеточных популяций и свидетельствует о неиммортализованности линий. Количественный и структурный кариотипический анализ показал, что линии имеют нормальный кариотип 46, XX. Но для линий DF-1 и DF-3 показано наличие ряда неклональных хромосомных перестроек. Для определения статуса линий провели сравнительный анализ поверхностных маркеров с помощью проточной цитофлуориметрии. Анализ выявил во всех линиях экспрессию поверхностных антигенов, характерных для МСК человека (CD44, CD73, CD90, CD 105 и HLA-ABC), и отсутствие экспрессии CD34, CD45 и HLA-DR. Иммунофлуоресцентный анализ показал наличие экспрессии виментина во всех линиях, подтвердив статус МСК. Показана экспрессия коллагена 1-го типа, характеризующего фибробласты. Проточная цитофлуориметрия и иммунофлуоресцентный анализ показали наличие экспрессии маркера недифференцированных эмбриональных стволовых клеток — SSEA-4 — и маркеров их ранней дифференцировки в производные трех зародышевых листков, что, по-видимому, обеспечивает широкие возможности линий дермальных фибробластов при репарации разных тканевых повреждений. Показана способность клеток всех линий дифференцироваться в остеогенном, хондрогенном и адипо-генном направлениях. В линии DF-3 уровень остеогенной дифференцировки значительно ниже, чем в DF-1 и DF-2. Возможно, что низкий уровень дифференцировки связан с большим возрастом донора (53 года). По остальным характеристикам зависимости от возраста донора (37—53 года) не обнаружено.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2016
Объем: 15с.
Дополнительная информация: 2016.-N 11.-С.850-864. Библ. 23 назв.
Просмотров: 59