Иммунологический анализ атеросклеротических бляшек человека в системе культивирования ex vivo

Аннотация:

Цель исследования: анализ динамики лимфоцитарного состава атеросклеротических бляшек человека в системе культивирования ex vivo. В исследование было включено 15 атеросклеротических бляшек, полученных в результате операций каротидной эндатерэктомии. Бляшки культивировали в виде кольцевидных блоков согласно разработанной ранее методике на коллагеновых губках в культивационной среде подобранного состава в С02 инкубаторе. В 0-й день, а также в 4-й и 19-й дни культивирования выделяли клетки из эксплантов бляшек и методом мультипараметрической проточной цитометрии анализировали в них содержание В-, Т-лимфоцитов и их субпопуляций, а также CD16+ клеток естественных киллеров (NK). Для этого обрабатывали ткани бляшек созданным ранее ферментативным коктейлем, позволяющим сохранять поверхностные клеточные маркеры, и окрашивали выделенные клетки флуоресцентно-меченными моноклональными антителами к CD45, CD3, CD19, CD4, CD8, CD16. Кроме того, с помощью проточной цитометрии определяли количество интерлейкин-2 (IL-2) и интерферон-гамма IFN-y-продуцирующих Т клеток. В результате через 4 дня культивирования в эксплантах бляшек снижалось общее количество лимфоцитов, однако сохранялись живые лимфоциты (2619.3[1680.4;3478.2] клеток/100мг ткани), в том числе Т-клетки (2123.4[484.9;3181.2] клеток/100 мг ткани), В-клетки (5.6[3.4;27.9] клеток/100 мг ткани) и CD16+ NK-клетки (10.6[1.8;23.7] клеток/100мг ткани). На 4-й день культивирования Т-клетки были представлены CD4+CD8+(797[475.5;1000.7] клеток/100мг ткани, 37.5[32.1;46.3]%) и CD4-CD8+ (686.2[423.6;1158.4] клеток/100мг ткани, 45.6[38.1;47.9]%) субпопуляциями. При этом процент популяции CD4+CD8+ Т-клеток снижался относительно 1-го дня культивирования, что коррелировало с приростом содержания CD4CD8 Т-клеток (р<0.05). Кроме того, через 4 дня культивирования в эксплантах бляшек сохранялись как CD8+(17.5[13.3; 19.9]%), так и CD8 (9.9[6.4;14]%) IFN-у-продуцирующие Т-клетки, однако наблюдалась тенденция к снижению их количества, а также количества IL-2-продуцирующих Т-клеток. Через 19 дней культивирования в эксплантах атеросклеротических бляшек также сохранялись лимфоциты (2830.1[2350.3;5900.2] клеток/100мг ткани), в том числе Т-клетки (2594.5[2035.7;5306.7] клеток/100мг ткани), представленные CD4-CD8+ (1016.8(671.2;2201.7] клеток/100мг ткани, 42.3[34.3;47.8]%) и CD4-CD8+ (1534.3[813.8;2207.2] клеток/100мг ткани, 50.8[45.6;56.5]%) субпопуляциями, В клетки (31[18.3;64.4] клеток/100мг ткани) и CD16+ NK клетки 44.9[33.4;138.9] клеток/100 мг ткани. Обсуждение. Разработанная нами ранее ex vivo методика культивирования атеросклеротических бляшек человека позволяет сохранять жизнеспособность различных популяций лимфоцитов в течение 19 дней. Было обнаружено, что в процессе культивирования также сохраняются Т-клетки, способные осуществлять Т-хелпер-1-зависимый иммунный ответ, характерный для воспаления в атеросклеротических бляшках. Полученные результаты делают возможным проведение экспериментов по исследованию иммунологических механизмов атерогенеза, а также разработку новых подходов к терапии атеросклероза, направленных на локальное подавление воспаления в бляшке. В ex vivo культуре атеросклеротической бляшки человека в течение длительного времени сохраняются CD4+CD8- и CD4-CD8+ Т- и В-лимфоциты, а также CD16+ NK клетки. Более того, при культивировании на 4-й день в ткани также сохраняются IFN-y+ Т-клетки.

Авторы:

Издание: Кардиология
Год издания: 2016
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2016.-N 11.-С.78-85. Библ. 29 назв.
Просмотров: 44