ПРОВЕДЕНИЕ ТОЧНОЙ НОРМИРОВКИ РЕЗУЛЬТАТОВ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ПРИ РАБОТЕ С ИНДУЦИРОВАННЫМИ ПЛЮРИПОТЕНТНЫМИ СТВОЛОВЫМИ КЛЕТКАМИ И ПОЛУЧЕННЫМИ ИЗ НИХ ДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫМИ В НЕЙРАЛЬНОМ НАПРАВЛЕНИИ КЛЕТОЧНЫМИ ЛИНИЯМИ

Аннотация:

ПЦР в реальном времени является распространенным методом количественного определения уровня экспрессии генов. В настоящее время общепринятым является подход к нормировке результатов ПЦР в реальном времени, изложенный в 2002 г. в статье Vandesompele J. et al. Данный подход основан на вычислении нормировочных факторов (NF) с использованием сразу нескольких генов домашнего хозяйства. Для нормировки предлагалось выбрать несколько генов с наиболее стабильной экспрессией из 10 генов (АСТВ, В2М, GAPDH, HMBS, HPRTI, RPLI3A, SDHA, ТВР, UBC, YWHAZ). В данной статье был изложен и алгоритм для оценки стабильности экспрессии генов домашнего хозяйства, а так же алгоритм выбора достаточного количества генов для нормировки (обычно 3-4 гена). Тем не менее, для достижения оптимальной нормировки не всегда удается ограничиться работой только с этими десятью генами.Таким образом, вопрос об оптимальной группе генов домашнего хозяйства, из которых можно Лбрать гены для нормировки в каждом конкретном экс-яерименте, остается открытым. В 2013 г. в статье benberg Е., Levanon Е. Y. были приведены результаты чранскриптомного анализа, направленного на поиск генов домашнего хозяйства, и на отбор из найденных генов наи-. более стабильно экспрессирующихся в различных типах клеток. В итоге было выбрано 11 ранее не известных Получив информацию, о том какие гены обладают наиболее стабильной экспрессией, мы определили минимальный набор генов для каждой группы клеток, достаточный для точной нормировки результатов ПЦР в реальном времени . Таким образом, для точной нормировки результатов ПЦР в реальном времени при работе с фибробластами следует использовать нормировочный фактор, рассчитанный по уровням экспрессии двух генов домашнего хозяйства (NF2), при работе с ПСК следует использовать NF4, при работе с ИСК — NF2, при работе с нейронами — NF3, при работе с совокупностью всех культур — NF3.

Авторы:

Издание: Медицинский академический журнал
Год издания: 2016
Объем: 3с.
Дополнительная информация: 2016.-N 4.-С.195-197. Библ. 3 назв.
Просмотров: 46