УКОРОЧЕНИЕ ТЕЛОМЕР И ПОВРЕЖДЕНИЕ ДНК АПОПТОТИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗОЙ ENDOG ПРИВОДЯТ К ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ CD4+ Т КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

Теломераза является мультиферментативным комплексом, который синтезирует теломерные повторы TTAGGG на 3-концах хромосом человека. Злокачественные опухолевые клетки, нормальные стволовые клетки и активированные лимфоциты обладают теломеразной активностью, что позволяет им поддерживать повышенный репликатив-ный потенциал .Ингибирование теломеразы в нормальных клетках вызывает укорочение теломер до критических значений, переход клеток в состояние репликатив-ного старения и апоптоз . Однако в единичных клетках укорочение теломер вызывает хромосомные мутации, что приводит к их злокачественной трансформации . Ранее мы показали, что сверхэкспрессия апоптотической эндо-нуклеазы EndoG вызывает альтернативный сплайсинг каталитической субъединицы теломеразы hTERT (human Telmerase Reverse Transcriptase) и ингибирует ее активность. Кроме того, EndoG вызывает повреждение ДНК по полив-полиС последовательностям . Целью работы явилось изучение влияния сверхэкспрессии EndoG на активность теломерзы в нормальных, не опухолевых клетках, способности EndoG вызывать повреждения в клетках ДНК, а так же проследить дальнейшую судьбу клеток. CD4+ Т клетки человека трансфицировали плаз-мидой pEndoG-GFP или контрольной плазмидой pGFP. ОТ-ПЦР в реальном времени и метод Вестерн блоттинга применяли для изучения экспрессии EndoG и сплайс-вариантов hTERT. Оценку активности теломеразы проводили методом TRAP (Telomeric Repeats Amplification Protocol). Методом проточной цитометрии проводили исследование иммунофенотипических характеристик клеток. Метод TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling), адаптированный для проточной цитометрии применяли для анализа уровня повреждения ДНК клеток. Сверхэкспрессия EndoG в CD4+ Т клетках человека вызывала увеличение экспрессии сплайс-варианта hTERT и уменьшение экспрессии полноразмерного активного варианта. Изменение пропорции сплайс-вариантов hTERT в клетках приводило к понижению активности теломеразы. Сверхэкспрессия EndoG вызывала повреждения ДНК в большинстве клеток. Дальнейшее культивирование таких клеток приводило к резкому укорочению длины теломер до критических значений и переходу клеток в состояние репликативного старения. Репликативное старение сопровождалось увеличением экспрессии и активности бета-галактозидазы.

Авторы:

Издание: Медицинский академический журнал
Год издания: 2016
Объем: 1с.
Дополнительная информация: 2016.-N 4.-С.205-205. Библ. 4 назв.
Просмотров: 33