Оптимизация состава питательных сред для культивирования клеточной линии СНО - продуцента моноклонального антитела Адалимумаб к фактору некроза опухолей альфа

Аннотация:

В работе описана стратегия оптимизации профиля гликозилирования моноклонального антитела к фактору некроза опухолей альфа, Адалимумаб, продуцируемого суспензионной культурой клеток СНО. Адалимумаб - это аналог моноклонального антитела, которое служит основной составляющей препарата Хумира (Humira), выпускаемого компанией Abbot GmbH & Co. KG (США). В разработке соответствующей технологии ориентировались на способ культивирования в замкнутом объеме с периодическим добавлением подпиток (fed-batch), используя большой набор питательных сред и подпиток от разных производителей. Все среды и подпитки не содержали компоненты животного происхождения и были предназначены для суспензионного культивирования клеток СНО. Анализ отделенных от антитела олигосахаридов и их сравнение с компонентами оригинального препарата осуществляли с использованием хроматомасс-спектрометрии. Были исследованы три партии данного препарата; во всех обнаружены типичные гликаны моноклональных антител, произведенных в клетках СНО: комплексные фукозилированные G0F/G1F/G2F и нефукозилированные G0/G1, а также гликаны с пятью остатками маннозы (Мап5). Соотношение форм гликанов также оказалось вполне типично для антител, полученных с использованием клеток СНО: преимущественные формы содержали фукозу и не содержали галактозу. На основе полученных профилей гликанов, а также анализа продуктивности при разных условиях культивирования для дальнейших исследований было выбрано сочетание среды Dynamis (Gibco, США) и подпитки ActiCHOA/B (GE Healthcare, Австрия), которые обеспечивали продуктивность по антителу 1,58 г/л в режиме fed-batch. Было установлено, что по содержанию остатков галактозы (19,6% в полученном препарате против 23,5% в оригинальном) и фукозы (85,7% против 88,7%) полученное антитело близко к оригинальному, т.е. содержание основных гликанов и составляющих их моносахаридов приближено к желаемому. Существенное отличие обнаруживается только по содержанию минорного гликана Мап5: 1,7% против 6,3%. Значимость данных различий можно оценивать двояко: с одной стороны, они находятся вне пределов изменчивости оригинального препарата, с другой - они получены на раннем этапе разработки препарата, при культивировании в малом объеме.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2016
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2016.-N 6.-С.60-67. Библ. 25 назв.
Просмотров: 103