ГЛУТАМАТДЕКАРБОКСИЛАЗА ИЗ Escherichia coli: ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА gad A, ОЧИСТКА И СВОЙСТВА GADa

Аннотация:

Описан способ получения рекомбинантной глутаматдекарбоксилазы из Escherichia coli. Фермент катализирует превращение L-глутамата в гамма-аминомасляную кислоту и углекислый газ. Ген gadA был клонирован при помощи ПЦР с геномной ДНК штамма Е. coli ТGI на основе известной нуклеотидной последовательности. Экспрессию гена проводили в составе вектора pGEMEXl и штамма Е. coli BL21(DE3). Удельная активность фермента достигает 4.0-7.3 ед./мг сырого веса биомассы, что более чем на порядок превышает аналогичные данные для природного штамма Е. coli 600. Модифицирован метод выделения фермента и получены препараты гомогенной глутаматдекарбоксилазы с удельной активностью 171-176 ед./мг белка. Гомогенность фермента подтверждена с помощью электрофореза в ПААГ и соответствующей величиной отношения оптической плотности при 280 и 420 нм. Удельная активность, k cat и спектры поглощения рекомбинантного фермента такие же, как у природного фермента, полученного из штамма E. coli 600.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1999
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 1999.-N 4.-С.560-566
Просмотров: 80