ГЕНЕТИЧЕСКОЕ КОНСТРУИРОВАНИЕ НАТИВНЫХ КОМБИНАЦИЙ ЦЕПЕЙ В-КЛЕТОЧНЫХ РЕПЕРТУАРОВ НА ПОВЕРХНОСТИ МЕТИЛОТРОФНЫХ ДРОЖЖЕЙ PICHIA PASTORIS

Аннотация:

В современной иммунологии и фундаментальной и клинической медицине структурно-функциональный анализ репертуара иммунных рецепторов как отдельных индивидуумов, так и различных их групп является одним из распространенных методов в изучении механизмов иммунного ответа и заболеваний иммунной природы. Иммунные рецепторы, антитела и Т-клеточные рецепторы состоят из двух полипептидных цепей (легкой и тяжелой цепи в случае с иммуноглобулинами и а/у и (3/5 в случае с Т-клеточными рецепторами), которые кодируются разными мРНК-транскриптами. Функциональные исследования комбинаторных библиотек генов иммуноглобулинов предоставляют уникальные возможности для выявления триггерных механизмов развития аутоиммунных патологий и динамики ответа иммунной системы человека на инфекцию. Большинство используемых иммунных библиотек конструируются на основе случайных комбинаций тяжелых и легких цепей одного иммунного репертуара, что может искажать нативную композицию этих белковых молекул. В настоящее время интенсивно развивается новый подход к широкомасштабному структурному анализу иммунных рецепторов, который заключается в получении "ампликонов" единичных клеток—ДНК-фрагментов, объединяющих в единую нуклеотидную последовательность нативную комбинацию обеих цепей иммунного рецептора каждого лимфоцита, и дальнейшем высокопроизводительном секвенировании полученного пула последовательностей. Однако в составе получаемых таким образом ампликонов нуклеотидные последовательности обеих цепей ориентированы "голова к голове", что исключает возможность интегрировать подобный ампликон в состав какого-либо известного экспрессионного вектора и проводить в дальнейшем скрининг и функциональный анализ иммунных репертуаров. Созданы генетические конструкции, позволяющие получать на поверхности клеток дрожжей Pichia pastoris библиотеку Fab-фрагментов антител, содержащих нативную комбинацию цепей индивидуального В-лимфоцита. На примере полученного ранее антитела А17 показано, что уровень Fаb-фрагмента антитела на поверхности дрожжевых клеток сравним с таковым при совместной котрансформации векторов, содержащих последовательности каждой цепи. Разработан адекватный способ получения библиотек генов иммуноглобулинов, полностью соответствующих характеристикам реальных репертуаров В-лимфоцитов человека.

Авторы:

Издание: Бюллетень экспериментальной биологии и медицины
Год издания: 2017
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2017.-N 2.-С.231-236. Библ. 9 назв.
Просмотров: 23