ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ Pmal Н+-АТРазы ДРОЖЖЕЙ ПРИ ИЗМЕНЕНИИ ЗАРЯДА: РОЛЬ ОСТАТКОВ Asp-739 И Arg-811

Аннотация:

В Pmal Н+-АТРазе плазматической мембраны дрожжей Saccharomyces cerevisiae имеется консервативный остаток Asp-739, находящийся на границе трансмембранного сегмента Мб и цитозоля, замена которого на Asn и Val (Petrov et al. (2000) J. Biol. Chem., 275, 15709-15716) или Ala (Miranda et al. (2011) Biochim. Biophys. Ada, 1808, 1781-1789) вызывала полное блокирование биогенеза мутантного фермента, не достигавшего секреторных везикул. Было предположено, что между этим остатком и находящимися рядом остатками с положительным зарядом может возникать сильная ионная связь с образованием солевого мостика, и замена D739A вызывала разрыв этой связи. Выла построена гомологичная пространственная модель фермента, на основании которой было предположено, что таким стабилизующим остатком мог бы быть консервативный остаток Arg-811, расположенный в непосредственной близости от Asp-739. Для проверки этого предположения были использованы мутанты с единичными (D739V, D739N, D739A, D739R, R8IIL, R81IM, R811А и R811D) и двойными заменами, нейтрализующими заряды остатков Asp-739 и Arg-811 (D739A/R811А) или меняющими их полярность (D739R/R811D). Уровень экспрессии АТРаз с точечными заменами R811А и R81ID составлял 38—63%, а их активности — 29—30% от уровня дикого типа; гидролиз АТР и транспорт Н1 у этих ферментов были существенно разобщены. В случае остальных замен, включая двойные, биогенез фермента был практически блокирован. Результаты подтверждают важную роль остатков Asp-739 и Arg-811 в биогенезе и функционировании фермента и предполагают их участие в определении детерминант транспорта Н+, исключая, однако, наличие сильной ионной связи (солевого мостика) между ними и/или значение такой связи для структурно-функциональной организации Pmal Н+-АТРазы.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2017
Объем: 16с.
Дополнительная информация: 2017.-N 1.-С.121-136. Библ. 78 назв.
Просмотров: 33