ВКЛЮЧЕНИЕ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКИХ МУТАЦИЙ В КОНСЕРВАТИВНЫЕ УЧАСТКИ РА-ГЕНА ПРИВОДИТ К АТТЕНУАЦИИ ВИРУЛЕНТНОГО ШТАММА ВИРУСА ГРИППА A/WSN/33

Аннотация:

Цель: Исследование возможности получения аттенуированных вариантов вируса гриппа с помощью включения специально подобранных сайт-специфических мутаций в консервативную последовательность РА-гена (концевую часть СООН-домена РА-гена) вирулентного штамма. В работе был использован вирулентный штамм вируса гриппа A/WSN/33. Включение сайт-специфических мутаций в РА-ген вирулентного штамма A/WSN/33 проводили с помощью двуступенчатой мутационной ПЦР Клонирование осуществляли, используя GoldenGate реакцию. Использовали 8-плазмидную трансфекционную систему на основе вектора pHW2000. Трансформацию проводили на рубидиевых компетентных бактериальных клетках штамма DH5a. Трансфекцию делали при помощи реагента Lipofectamine LTX (Invitro-gen) в кокультуре клеток 293Т и MDCK. В результате показано, что трансфектанты, содержащие замену F658A в СООН-домене РА-гена, приобрели ts-фенотип и резко снизили способность к размножению в легких мышей. Включение замены F658A в СООН-домен РА-гена в комбинации с включением в геном вирулентного штамма ts-мутаций из генов ХА штаммов вируса гриппа приводило к получению трансфектантов, обладающих фенотипическими характеристиками, типичными для кандидатов в живые гриппозные вакцины. Показана возможность получения аттенуированных вариантов вируса гриппа путем включения специально подобранных сайт-специфических мутаций в консервативную последовательность РА-гена.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2017
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2017.-N 2.-С.45-54. Библ. 13 назв.
Просмотров: 34