ВЫСОКИЙ УРОВЕНЬ ЭКСПРЕССИИ И АТФазная АКТИВНОСТЬ РЕКОМБИНАНТНОГО РАСТВОРИМОГО БЕЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКА GRP78 ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

Обнаружено, что белок теплового шока GRP78 стимулирует рост опухолей, поэтому он может рассматриваться в качестве новой мишени для действия противораковых лекарств. Актуальным остается вопрос о получении больших количеств полноцепочечного рекомбинантного белка GRP78. В данной работе показано, что этот рекомбинантный белок GRP78 можно получать в значительных количествах в активном состоянии путем аутоиндукции клеток Е. coli. Конечный выход белка составлял ~50 мг на I л культуры клеток, подвергшихся аутоиндукции. С помощью метода гель-фильтрации показано, что полученный шапероновый белок находится в мономерном состоянии. Очищенный белок GRP78 человека катализирует превращение АТФ в АДФ и не требует ионов металлов в качестве кофакторов. Три мутантные формы белка, содержащие единичные аминокислотные замены, а именно Т38А, Т229А и S300A, демонстрировали меньшую АТФазную активность по сравнению с белком дикого типа, что указывает на локализацию активного центра АТФазы в отрицательно заряженной полости белка. Замены аминокислотных остатков в отрицательно заряженной полости, приводящие к значительному снижению активности фермента, указывают на их важную роль в ферментативной активности.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2017
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2017.-N 2.-С.301-308. Библ. 27 назв.
Просмотров: 31