РАСТИТЕЛЬНЫЕ БИОСИМИЛЯРЫ ПЕРТУЗУМАБА И ТРАСТУЗУМАБА: МОДИФИКАЦИЯ АSN297-СВЯЗАННОГО ГЛИКАНА АНТИТЕЛ, ПРОДУЦИРОВАННЫХ В РАСТЕНИИ С НОКАУТОМ ГЕНОВ ФУКОЗИЛ- И КСИЛОЗИЛТРАНСФЕРАЗЫ

Аннотация:

Растительные биосимиляры антираковых терапевтических антител представляют интерес не только из-за перспективы их практического использования, но и как инструмент и объект исследования особенностей гликозилирования растительного белка. В данной работе впервые создан растительный биосимиляр пертузумаба (РБП) и исследован состав его А5п297-связанного гликана в сравнении с растительным биосимиляром трастузумаба (РБТ). Оба антитела продуцировали в Nicotiana benthamiana дикого типа (WT, РБП-WT и PBT-WT) и в трансгенных растениях N. benthamiana AXTFT с нокаутом генов XT и /Т (РБП-AXTFT и РБТ-AXTFT). Вестерн-блот анализ с использованием антител к альфа1,3-фукозе и ксилозе, а также тест с использованием пептид-УУ-гликозидазы F подтвердили отсутствие фукозы и ксилозы в составе РБП-AXTFT и РБТ-AXTFT. Пептидный анализ с последующей идентификацией модифицированных пептидов при использовании тандемного время-пролетного масс-спектрометра с лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI-TOF/TOF) показал, что А5п297-связанные гликаны РБП-WT и PEST-WT представляют собой, главным образом, гликаны сложного типа GnGnXF. Сердцевинный участок А5п297-связанного гликана типа GnGn у РБП-WT и PBT-WT содержит по остатку альфа1,3-фукозы и бета1,2-ксилозы, что, наряду с отсутствием терминальной галактозы и сиаловой кислоты, отличает эти растительные биосимиляры от иммуноглобулина G человека. Результаты анализа общего содержания углеводов PBT-AXTFT свидетельствует о возможности изменения углеводного состава не только константной, но и вариабельной части антитела, продуцируемого в трансгенных растениях N. benthamiana AXTFT с нокаутом генов XT и FT. Тем не менее, исследование антиген-связывающей способности биосимиляров показало, что отсутствие остатков ксилозы и фукозы в А5п297-связанном гликане РБП-AXTFT и PBT-AXTFT не влияет на способность этих антител взаимодействовать с раковыми клетками, содержащими на своей поверхности онкобелок HER2/neu.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2017
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2017.-N 4.-С.687-699. Библ. 27 назв.
Просмотров: 34