НОВЫЙ РЕКОМБИНАНТНЫИ ПРОДУЦЕНТ ОМЕГА-АМИДАЗЫ ЧЕЛОВЕКА НА ОСНОВЕ Escherichia coli

Аннотация:

Создан искусственный ген омега-амидазы человека (Nit2), адаптированный для высокоэффективной экспрессии в клетках Е. coli, получена плазмидная конструкция pQE-Nit2 на его основе, контролируемая промотором фага Т5. Особенностью гена NIT2 в составе конструкции pQE-Nit2 является оптимизированный кодоновый состав, а также наличие искусственно введенной аффинной метки 6His-тaг непосредственно после инициаторного кодона ATG (Met), обеспечивающей возможность одностадийной очистки продукта методом металлоаффинной хроматографии на Ni-NTA-агарозе. Оптимизация кодонового состава гена NIT2 проведена таким образом, чтобы вблизи стартовой точки трансляции (первые тридцать кодонов) находилось несколько кодонов, редко встречающихся в природных открытых рамках считывания генома Е. coli, а остальные приходились на кодоны с умеренной встречаемостью. На остальном протяжении открытой рамки считывания использовались только кодоны, наиболее часто употребляемые в открытых рамках считывания генома Е. coli. С помощью рекомбинантного продуцента получен препарат фермента с активностью 6.2±0.2 мкмоль/мин х мг белка, что соответствует или несколько превышает описанную в литературе удельную активность эталонного фермента из печени крысы. Препарат омега-амидазы человека востребован для тестирования ингибиторов фермента — потенциальных лекарственных средств для коррекции гипераммониемических расстройств при печеночной патологии и лечения онкологических заболеваний.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2017
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2017.-N 3.-С.271-277. Библ. 26 назв.
Просмотров: 40