НАРУШЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МИТОХОНДРИЙ ПРИ МТТ-АНАЛИЗЕ ВЫЖИВАЕМОСТИ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ НЕЙРОНОВ

Аннотация:

МТТ-анализ, основанный на восстановлении 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия в цитоплазме клеток до сильно поглощающего свет формазана, относится к числу наиболее используемых для определения выживаемости клеток и активности NAD-зависимых оксидоредуктаз. В работе исследовано влияние МТТ (0,1 мг/мл) на митохондриальный потенциал (дельта,пси,m), внутриклеточный NADH, а также на дыхание культивируемых нейронов мозжечка крысы и изолированных митохондрий из печени крысы. МТТ вызывал быстрое тушение автофлуоресценции NADH, флуоресценции митотрекера зеленого (MTG) и дельта,спи,m-чувствительных зондов Rhl23 и TMRM. Сигнал Rhl23, в отличие от NADH, MTG и TMRM, увеличивался через 5—10 мин в нуклеоплазме и сопровождался образованием в цитоплазме и нейритах непрозрачных агрегатов формазана. Рост сигнала Rhl23 свидетельствовал о диффузии зонда из митохондрий в цитозоль и ядро в результате падения A4V Ингибирование комплекса I дыхательной цепи снижало, тогда как ингибирование комплекса увеличивало скорость образования формазана. Ингибирование комплекса III и АТФ-синтазы не оказывало значимого эффекта на скорость образования формазана. Ингибирование гликолиза 2-дезокси-D-глюкозой блокировало восстановление МТТ, в то время как пируват концентрационно-зависимо увеличивал скорость образования формазана. МТТ снижал скорость потребления кислорода культивируемыми нейронами до величины, наблюдаемой при одновременной блокаде комплексов I и III дыхательной цепи, и подавлял дыхание изолированных митохондрий, если использовали субстраты, окисляемые NAD-зависимыми дегидрогеназами. Полученные результаты показывают, что в культивируемых нейронах мозжечка крысы образование формазана происходит преимущественно в митохондриях. Начальная скорость образования формазана может служить показателем активности комплекса I и транспорта пирувата.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2017
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2017.-N 6.-С.970-983. Библ. 42 назв.
Просмотров: 31