ПЛАЗМИДА С ТЕРМОЧУВСТВИТЕЛЬНОЙ МУТАЦИЕЙ В ГЕНЕ ДНК-МЕТИЛАЗЫ СИСТЕМЫ Psti: ВЛИЯНИЕ НА КЛЕТКИ-ХОЗЯЕВА ПРИ НЕПЕРМИССИВНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ

Аннотация:

С помощью гидроксиламинового мутагенеза in vitro получены ts-производные плазмиды pRMPI (дериват pBR322, содержащий гены рестрикции и модификации (R-M) системы Рstl), ингибирующие рост клеток Escherichia coli при 42°С. Одна из полученных плазмид - pRMPts - исследована в настоящей работе. Клетки штаммов Rec^ несущие эту плазмиду, в условиях роста при 42°С неспособны делиться и образуют длинные несептированные нити (филаменты), которые погибают при достаточно продолжительном культивировании. Клетки штаммов RecA~, несущие pRMPts, при 42°С филаментов не образуют и быстро погибают. На агаризованных средах с ампициллином или без антибиотика при 42°С штаммы Rec+ и RecA~ бактерий, несущие pRMPts, образуют колонии температуронезависимых (tr) производных с частотой, варьирующей от 1.5 х 10 до 4 х 10"6 у независимых клонов. Используя набор рестриктаз, изучена структура плазмид из клеток tr-производных Rec+ и RecA" штаммов, несущих pRMPts. Показано, что реверсии к температуронезависимому фенотипу могут быть результатом: 1) инсерционной инактивации гена рестриктазы Pst\ у pRMPts (внедрение элемента IS1), 2) делеций фрагментов плазмидных ДНК, захватывающих полностью или частично ген рестриктазы, 3) точечных мутаций и 4) других событий. Исследовано влияние хромосомной мутации sulA на поддержание ts-плазмиды в бактериальных клетках при 42°С. Показано, что клетки Rec"1' с мутацией sulA: :Тп5, несущие pRMPts, в условиях роста в жидкой среде и на твердых питательных средах при 42°С эффективно утрачивают плазмиду. Элиминации ts-плазмиды из клеток SulA'1' не происходит. На основании полученных данных сделано заключение о том, что ts-мутация в плазмиде pRMPts локализована в гене ДНК-метилазы. При 42°С мутантная ДНК-метилаза оставляет неметилированными определенное количество сайтов в хромосомной ДНК. Эти сайты расщепляются рестриктазой Pst\, что приводит к индукции SOS-ответа в клетках Rec* или к гибели клеток с генотипом гесА.

Авторы:

Издание: Генетика
Год издания: 1999
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 1999.-N 5.-С.574-586
Просмотров: 35