ИНДУКЦИЯ АЛЬТЕРНАТИВНОГО СПЛАЙСИНГА И ИНГИБИРОВАНИЕ АКТИВНОСТИ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ СУБЪЕДИНИЦЫ ТЕЛОМЕРАЗЫ В Т, В И NK КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА АПОПТОТИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗОЙ EndoG

Аннотация:

Исследовали влияние апоптотической эндонуклеазы EndoG на альтернативный сплайсинг мРНК каталитической субъединицы теломеразы hTERT (human Telomerase Reverse Transcriptase) и активность теломеразы в нормальных лимфоцитах человека. CD4+, CD8+, В и NK клетки человека трансфицировали плазмидой, содержащей ген EndoG (pEndoG-GFP), или контрольной плазмидой pGFP. УровеньмРНК EndoG и сплайс-вариантов hTERT проводили методом ОТ-ПЦР вреальном времени. Содержание белка оценивали с помощью вестерн-блоттинга. Активность теломеразы определяли по протоколу амплификации теломерных повторов. Сверхэкспрессия EndoG в клетках вызывала снижение экспрессии полноразмерного активного варианта /гГЕКГ и увеличение экспрессии неактивного сплайс-варианта. Нарушение пропорции сплайс-вариантов hTERT в клетках приводило к значительному снижению теломеразной активности уже через 72 ч после трансфекции. Теломераза представляет собой мультибелковый комплекс, синтезирующий теломерные повторы TTAGGG на концах хромосом человека. Главными компонентами теломеразы является hTR (Human Telomerase RNA), включающая в себя РНК-матрицу для синтеза теломер, а также hTERT (Human Telomerase Reverse Transcriptase), обладающая обратно-транскриптазной активностью и синтезирующая теломерные повторы на матрице hTR. Теломераза активна в нормальных половых клетках, стволовых клетках и активированных лимфоцитах, а также в большинстве типов раковых клеток, она поддерживает высокий пролиферативный потенциал клеток.

Авторы:

Издание: Бюллетень экспериментальной биологии и медицины
Год издания: 2017
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2017.-N 10.-С.479-483. Библ. 11 назв.
Просмотров: 34