РЕКОМБИНАНТНЫЙ ЭРИТРОПОЭТИН ЧЕЛОВЕКА С ПРОЦЕССИРУЕМЫМИ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫМИ БЕЛКОВЫМИ ДОМЕНАМИ: ОЧИСТКА БЕЛКА, СИНТЕЗИРОВАННОГО В ГЕТЕРОЛОГИЧНОЙ СИСТЕМЕ ЭКСПРЕССИИ В Escherichia coli

Аннотация:

Синтезом в гетерологичной системе экспрессии is Escherichia coli получены три варианта рекомбинантного эритропоэтина человека (rhEPO), несущие на УУ-концах дополнительные белковые домены: 1) мальтозосвязывающий белок (МВР), 2) МВР с шестью остатками гистидина (6His) в N-концевом положении, 3) s-tag (15-звенный олигопептид из рибонуклеазы А поджелудочной железы быка) также с 6His на N-конце. Оба варианта белка, содержащие МВР, характеризовались склонностью к агрегации в неденатурирующих условиях, а после специфического отщепления МВР энтерокиназой оказалось невозможным разработать процедуру разделения эритропоэтина и отщепленного домена. В случае химерного белка 6His-s-tag-EPO удалось разделить продукты протеолиза энтерокиназой с помощью колоночной хроматографии, и был получен rhEPO без дополнительных белковых доменов. MALDl-TOF-масс-спектрометрический анализ показал, что химерный белок 6His-s-tag-EPO после проведения рефолдинга формирует структуру, близкую к натив-ной, с двумя дисульфидными связями. Kaк 6His-s-tag-EPO, так и очищенный после протеолитического гидролиза rhEPO без дополнительных доменов обладали одинаковой биологической активностью in vitro на культуре клеток.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2017
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2017.-N 11.-С.1635-1646. Библ. 26 назв.
Просмотров: 38