САМООРГАНИЗАЦИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО МЕМБРАННОГО ПОРИНА ОmрF Yersinia pseudotuberculosis В ВОДНЫХ СРЕДАХ

Аннотация:

Рекомбинантный порин OmpF (rOmpF) Yersinia pseudotuberculosis, который является интегральным белком наружной бактериальной мембраны бактерий, был синтезирован в клетках Е. coli в виде телец включения. Сочетанием методов анионообменной и гель-проникающей хроматографии, порин был выделен в индивидуальном виде и в денатурированном состоянии и охарактеризован: определены молекулярная масса, N-концевая аминокислотная последовательность и гидродинамический радиус белка в растворе 8 М мочевины. По данным гель-фильтрации, динамического рассеяния света, оптической спектроскопии и связывания с гидрофобным флуоресцирующим зондом, 8-анилино-1-нафталинсульфоновой кислотой, rOmpF в 8 М мочевине представлял собой полностью развернутый белок в конформации неупорядоченного клубка. В работе были показаны конформационные изменения, обратимая самоассоциация и агрегация rOmpF в водных средах. При переводе из 8 М мочевины в воду, фосфатно-солевой буфер (рН 7,4, содержащий 0,15 М NaCl) или буфер, рН 8, содержащий 0,8 М мочевины, полностью развернутый порин формировал относительно компактные мономерные интермедиаты, склонные к самоассоциации с образованием мультимеров. Олигомерные интермедиаты сворачивания характеризуются высоким содержанием вторичной структуры, близкой по типу к нативной, а также достаточно выраженной третичной структурой. В условиях кислой среды с рН 5, близким к изоэлектрической точке белка, порин демонстрировал достаточно быструю необратимую агрегацию. В результате проведенной работы наглядно показано, что состав среды значительным образом влияет как на сворачивание порина, так и на процессы самоассоциации и агрегации белка.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2017
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2017.-N 11.-С.1657-1669. Библ. 23 назв.
Просмотров: 35