Конструирование плазмидного вектора для получения химерных антител заданной специфичности в клетках млекопитающих

Аннотация:

Цель. Получение универсальных генетических конструкций, кодирующих синтез легкой и тяжелой цепей химерного антитела, а также методических подходов для получения химерных антител заданной специфичности на примере моноклональных антител к дифтерийному токсину (ДТ) DT-17 в культуре клеток СНО и оценка их иммунохимических и эффекторных свойств. Материалы и методы. Методом ПЦР были получены гены вариабельных областей легких и тяжелых цепей мышиного антитела к дифтерийному токсину DT-17 и клонированы в плазмидном векторе pCI-neo. Генно-инженерными методами был получен «супервектор» SV DT-17neo, содержащий гены химерного антитела, использованием культуральных методов «супервектором» былатрансфицирована культу ра клеток СНО и получен высокопродуктивный клон, секретирующий химерные антитела к ДТ. Для оценки активности антител применяли иммунохимические методы, а для; получения препаративного количества антител — аффинную хроматографию. Результаты. Были получены универсальные векторы pLK DT-17 и pHG DT-17, содержащие гены легкой и тяжелой цепей химерного антитела к ДТ DT-17, где гены вариабельных и кон-; стантных областей были фланкированы сайтами рестрикции эндонуклеаз, что позволяет изменять специфичность антител, а в перспективе даст возможность перейти к исследованиям по изменению класса и видовой принадлежности химерного иммуноглобулин; При трансфекции культуры клеток СНО полученными векторами отмечалось накопление антител к ДТ в культуральной жидкости. Выход очищенных химерных антител DT-1 составил 4 мг с 1 л культуральной среды. Минимальная концентрация химерных анти при которой наблюдалась нейтрализация ДТ в культуре клеток СНО, составила 30 мкг/ мл среды. Заключение. Были сконструированы универсальные плазмиды, кодирующие синтез легкой и тяжелой цепей химерного антитела DT-17. На основе векторов был получен «супервектор» и высокопродуктивный клон, секретирующий специфические антитела, которые обладали нейтрализующей активностью в отношении ДТ.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2017
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2017.-N 6.-С.56-63. Библ. 9 назв.
Просмотров: 24