ТЕХНОЛОГИЯ СОЗДАНИЯ И СВОЙСТВА ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ ЗОНДОВ С МЕТКОЙ ALEXA-488 ДЛЯ АНАЛИЗА КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ

Аннотация:

Получение флуоресцентных зондов на основе моноклональных антител (МКА) к поверхностным антигенам лейкоцитов человека является актуальной задачей, решение которой даст возможность проводить научные и клинические исследования в области онкологии, гематологии, иммунологии, эпидемиологии. Цель исследования — создание флуоресцентных зондов на основе МКА и флуоресцентного красителя А1еха-488 для анализа клеточных популяций и субпопуляций лейкоцитов человека методом проточной цитометрии. В работе использовали МКА к антигену В-лимфоцитов (клон И КО-180) и флуоресцентный краситель Alexa-488 в форме активного моносукцинимидного эфира. МКА выделяли из асцитной жидкости мышей с привитой внутри-брюшинно гибридомой путем комбинированной очистки иммуноглобулиновой фракции каприловой кислотой и высаливания сульфатом аммония. Для очистки полученных конъюгатов (иммунофлуоресцентных зондов, ИФЗ) применяли гель-фильтрацию на колонке PD-10, концентрацию и плотность мечения ИФЗ определяли спектрофотометрически. Оценку биологической активности полученных ИФЗ проводили с использованием клеток периферической крови доноров в диапазоне концентраций МКА 0,5—100мкг/мл. Определение рабочего титра ИФЗ проводили по методу титрования антител, предложенному С. С. Stewart.

Авторы:

Издание: Российский биотерапевтический журнал
Год издания: 2017
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2017.-N 1.-С.70-75. Библ. 10 назв.
Просмотров: 21