СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ МИКРОВЕЗИКУЛ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ СРЕДЫ

Аннотация:

Внеклеточные микровезикулы (ВМВ) секретируются клетками многоклеточных организмов и обеспечивают "горизонтальный" межклеточный перенос веществ и информации. Этот феномен имеет важное биологическое значение и привлекает внимание тысяч исследователей. Большая часть исследований проводится в условиях in vitro экспериментов, позволяющих анализировать биогенез, структурные и функциональные особенности ВМВ. В лабораторной практике существует несколько методов выделения ВМВ из культуральной среды, причём выбор метода влияет на получаемые результаты. Оптимальный метод обычно определяется объёмом исследуемого материала и задачами исследования. В рамках данной работы проведен сравнительный анализ четырёх методов выделения ВМВ из культуральной среды: последовательное ультрацентрифугирование, ультрацентрифугирование с использованием "подушки" сахарозы, агглютинация ВМВ лектинами растительного происхождения и иммунопреципитация на латексных частицах. В исследовании был использован ряд глиальных клеточных линий человека. Проведена сравнительная оценка препаратов ВМВ, выделенных разными методами, по ряду параметров: размер, концентрация, морфология ВМВ, наличие примесей невезикулярной природы, содержание в мембране ВМВ экзосомальных тетраспанинов, содержание белка, тотальной РНК, и нескольких микроРНК, ассоциированных с развитием глиом. Использованы методы: анализ траекторий наночастиц, лазерная корреляционная спектроскопия, криоэлектронная микроскопия, проточная цитометрия, ОТ-ПЦР. По результатам работы сформулированы практические рекомендации относительно выбора оптимального метода с учетом возможных задач исследования.

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2018
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2018.-N 1.-С.23-29. Библ. 27 назв.
Просмотров: 26