РЕПОРТЕРЫ ФЕРМЕНТ-СУБСТРАТ ДЛЯ ОЦЕНКИ СУБСТРАТНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ ИЗОФОРМ HIF-ПРОЛИЛГИДРОКСИЛАЗЫ

Аннотация:

Естественный ответ организма на гипоксию осуществляется за счет стабилизации фактора, индуцируемого гипоксией (HIF). Известны три изоформы субъединицы HIFa, стабильность которых регулируется тремя изоферментами HIF-пролилгидроксилазы (PHD1—3). Несмотря на интенсивные исследования субстратной специфичности с помощью измерения активности рекомбинантных изоформ фермента по отношению к трем изоформам HIF, не удается однозначно ответить на вопрос о предпочтительном субстрате для каждой изоформы фермента. В данной работе предлагается новый подход к решению проблемы субстратной специфичности, основанный на использовании клеточных репортеров, экспрессирующих пару, содержащую фермент и меченый люциферазой субстрат с одного вектора. Клетка в данном случае используется как биореактор для проведения и мониторинга реакции между оверэкспрессируемыми ферментом и субстратом. С помощью нового подхода удалось продемонстрировать, что HIF3 не является субстратом изоформы PHD3, что косвенно указывает на гидроксилирование второго пролина в последовательности 564PYIP567 (HIF1) под действием этой изоформы. Использование «парных» репортеров фермент—субстрат для оценки ингибиторного действия разветвленных оксихинолиновых ингибиторов HIF-пролилгидроксилазы позволяет с большей точностью выявить структурный мотив, оптимальный для ингибирования отдельных изоформ фермента.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2018
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2018.-N 1.-С.78-86. Библ. 18 назв.
Просмотров: 50