Модификация системы, основанной на применении маркеров селекции и сортинга, для отбора стабильных трансфектантов

Аннотация:

Технология p-hook, основанная на экспрессии белковых доменов на поверхности клеток, модифицирована и использована для селекции и эффективного высокочувствительного сортинга стабильно трансфицированных CHO-S-клеток. Целевым продуцируемым белком и одновременно белком, маркирующим экспрессию, в работе служил модельный белок EYFP. Созданы химерные белки TiBP-PDGFR и CBD-PDGFR, которые обусловливают способность продуцирующих их клеток связываться с носителями - титаном и целлюлозной подложкой. В результате комбинированной селекции при помощи химерного белка CBD-PDGFR, экспонированного на клеточной мембране, была получена серия клональных линий с высоким и стабильным синтезом модельного белка. У трех клонов из отобранной серии уровень экспрессии гена модельного белка, детектируемый по флуоресценции, более чем в 30 раз превосходил среднее значение для исходного пула. Стабильность экспрессии EYFP-положительных клонов сохранялась на поздних (20-й и 35-й) пассажах культуры. Применение созданного химерного CBD-PDGFR-маркера селекции и сортинга приводит к быстрому отбору высокопродуктивных стабильных трансфектантов, что снижает затраты на получение коллекции продуктивных клеточных линий.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2018
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2018.-N 2.-С.9-17. Библ. 19 назв.
Просмотров: 28