РЕКОМБИНАНТНАЯ ПРОДУКЦИЯ, РЕКОНСТРУКЦИЯ В ЛИПИД-БЕЛКОВЫЕ НАНОДИСКИ И ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ ПОЛНОРАЗМЕРНОЙ а-СУБЪЕДИНИЦЫ КАЛИЕВОГО КАНАЛА Кv7.I ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

Потенциалозависимый калиевый канал Kv7.1 играет важную роль в возбудимости клеток сердечной мышцы. Основным структурным элементом этого канала является а-субъединица KCNQ1. При тетрамеризации KCNQI в мембране формируется ионный канал, включающий пору и четыре потенциалочувствительных домена. Мутации в гене KCNQ1 человека являются одной из основных причин наследственной аритмии — синдрома удлиненного интервала QT. В представленной работе получена синтетическая конструкция, кодирующая полноразмерный белок KCNQ1 человека, и разработана система его экспрессии в клетках дрожжей Pichia pastoris. Мембранную фракцию клеток дрожжей, содержавшую рекомбинантный белок (rKCNQI), солюбилизировали с помощью детергента CHAPS. Для моделирования липидного окружения канала, близкого к природному, из солюбилизированной мембранной фракции получали липид-белковые нанодиски на основе белка MSP2N2. Нанодиски, содержавшие целевой белок, отделяли с помощью очистки на аффинной смоле, используя последовательность rholD4, представленную на С-конце rKCNQI.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2018
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2018.-N 5.-С.735-748. Библ. 45 назв.
Просмотров: 31