Новые данные о локализации V2-рецептора вазопрессина у пациентов с гипертонической болезнью 2-3-й степени и здоровых лиц

Аннотация:

Резюме: Цель: сравнить процент эндотелиальных прогениторных клеток ( ЭПК) и слущенных эндотелиоцитов от общего количества клеток лимфоцитарной фракции у пациентов с гипертонической болезнью (ГБ) 2-3-й степени и практически здоровых лиц и оценить экспрессию рецепторов вазопрессина на эндотелиальных прогениторных клетках. Материалы и методы: Обследованы 20 пациентов с ГБ 2-3-й степени и 10 практически здоровых лиц контрольной группы. Проведены выделение ЭПК из плазмы крови, иммуноцитохимическое исследование методом комбинированного окрашивания с использованием первичных и вторичных антител; конфокальная микроскопия ЭПК и слущенных эндотелиоцитов. В результате выявлено, что процент ЭПК (фенотип CD31+CD133+) от общего количества клеток лимфоцитарной фракции у пациентов с ГБ 2-й степени (р=0,013) и у пациентов с ГБ 3-й степени выше, чем у практически здоровых лиц (р=0,008). Установлено, что процент слущенных эндотелиоцитов (фенотип CD31+CD133-) от общего количества клеток лимфоцитарной фракции у пациентов с ГБ 2-й степени (р=0,008) и у пациентов с ГБ 3-й степени выше, чем у практически здоровых лиц (р=0,019). Впервые выявлена локализация V2-рецептора вазопрессина на мембране ЭПК. Заключение. У пациентов с ГБ 2-й и 3-й степени значительно повышается процент ЭПК и слущенных эндотелиоцитов от общего количества клеток лимфоцитарной фракции, впервые выявлена локализация V2-рецептора вазопрессина на мембране ЭПК. Гипертоническая болезнь (ГБ) в России и во всем мире является одной из наиболее важных медико-социальных проблем. Это обусловлено широким распространением артериальной гипертонии (АГ) в России и тяжелыми осложнениями этой болезни, такими как инсульт, инфаркт миокарда, тяжелая сердечная недостаточность, расслаивающая аневризма аорты, нефросклероз, хроническая почечная недостаточность. При ГБ развиваются гиперпластические и гипертрофические изменения во внутренней оболочке артерий в виде расщепления эластической пластины на многочисленные слои: гиперплазия соединительнотканных элементов артериальной стенки, возрастное изменение, включающее эластоз и эластофиброз. Это приводит к снижению демпфирующей функции эластических артерий, повышению их жесткости. Ключевым звеном патогенеза ГБ является дисфункция эндотелия. На молекулярном уровне причинами дисфункции эндотелия служит нарушение локальной продукции оксида азота (NO), вызывающего вазодилатацию, ингибирующего адгезию и агрегацию тромбоцитов, предотвращающего миграцию и пролиферацию клеток, разрастание атеросклеротических бляшек. На клеточном уровне причиной дисфункции эндотелия являются повреждение и ускоренный апоптоз эндотелиальных клеток, возникающий при длительном воздействии факторов риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. К дисфункции эндотелия может приводить накопление в субэндотелиальном пространстве модифицированных форм липопротеинов низкой плотности. При дисфункции эндотелия снижается выработка вазодилататоров (оксид азота, простациклин) и повышается синтез вазоконстрикторов (эндотелии-1, тромбоксан А2), происходит активация эндотелия, который начинает экспрессировать молекулы клеточной адгезии, такие как растворимая форма молекул клеточной адгезии эндотелия и тромбоцитов 1-го типа (sPECAM-l), межклеточной адгезии (ICAM-1, ICAM-2), адгезии сосудистого эндотелия 1-го типа (VCAM-l), Р-селектин, Е-селектин, L-селектин. Вазопрессин (антидиуретический гормон, аргинин вазопрессин) - пептидный нейрогормон с коротким периодом полураспада, составляющим 5-20 мин, синтезирующийся в нейронах супраоптического и паравентрикулярного ядер гипоталамуса. Вазопрессин поступает по аксонам нейронов гипоталамуса в заднюю долю гипофиза - нейрогипофиз. Секреция вазопрессина в кровь происходит в ответ на увеличение осмолярности плазмы крови. Гиперактивность ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС) поддерживает высокий уровень вазопрессина в крови. Вазопрессин действует на 3 типа рецепторов: VIA, VIВ, V2. Все рецепторы вазопрессина являются классическими мембранными рецепторами. При действии вазопрессина на VlA-рецепторы, встроенные в мембраны гладких мышечных клеток сосудов, происходит сокращение гладких мышц сосудов (вазопрессорный эффект). В физиологических условиях вазопрессорный эффект вазопрессина выражен незначительно: увеличение секреции вазопрессина повышает артериальное давление (АД) не более чем на 5-10 ммрт.ст.. Воздействуя на VlB-рецепторы головного мозга, вазопрессин играет роль нейромедиатора. V2-рецепторы вазопрессина локализуются на базолатеральной мембране клеток собирательных трубочек почек и клеток восходящего отдела петли Генле. При действии вазопрессина на V2-рецепторы, встроенные в мембрану клеток собирательных трубочек почек, происходит реабсорбция воды в организме - антидиуретический эффект. Вазопрессин связывается с G-белками V2-рецептора на базолатеральной мембране клеток собирательных трубочек почек, происходит активация аденилатциклазы, образуется циклический аденозинмонофосфат, и поочередно включаются водные каналы аквапорина-2 на апикальной мембране клеток собирательных трубочек почек. Аквапорин-2 представляет собой «водный канал», избирательно пропускающий молекулы воды. Таким образом, взаимодействуя с V2 - рецепторами, вазопрессин увеличивает реабсорбцию воды в собирательных трубочках почек. По современным представлениям, в процессах репарации поврежденного сосудистого эндотелия и неоваскуляризации ишемизированных тканей важную роль играют эндотелиальные прогениторные клетки (ЭПК). Под воздействием цитокинов и факторов роста происходит высвобождение ЭПК из депо (костный мозг, селезенка, печень, жировая ткань). Главными факторами, стимулирующими мобилизацию ЭПК из костного мозга, являются фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, стромальный фактор 1-го типа (SDF-l), эстрогены. При повреждении сосудов ЭПК выходят из депо, возникает их направленная миграция по кровотоку в зоны поврежденного эндотелия, где ЭПК включаются в формирование сосудистой сети путем дифференцировки в эндотелиальные клетки. Таким образом, ЭПК играют важную роль в репарации сосудистой стенки. На поверхности ЭПК экспрессируются разные маркеры стволовых клеток (CD34, CD 133); маркеры эндотелиальных клеток (CD31, CD 144, фактор фон Виллебранда), а также рецептор фактора роста эндотелия сосудов 2-го типа (VEGFR2), эндотелиальная NO-синтаза (eNOS), тирозинкиназный рецептор 2 (Tie-2), рецептор домена киназнои вставки (KDR). Существует много фенотипов ЭПК, но маркеры для их идентификации не определены. Чаще всего для определения ЭПК используют сочетанную экспрессию поверхностных маркеров CD34, CD133 и VEGFR2. В настоящее время не установлено влияние вазопрессина на ЭПК, а также не изучены механизмы влияния вазопрессина на развитие дисфункции эндотелия. При действии на стенку сосуда повреждающих факторов, таких как высокое АД, гипергликемия, происходит «отделение» эндотелиоцитов от сосудистой стенки и попадание их в кровоток. Эти эндотелиоциты называются слущенными, или циркулирующими; они имеют поверхностный маркер CD31. В табл. 1 представлены основные рецепторы ЭПК и слущенных эндотелиоцитов. У здоровых лиц низкий уровень слущенных эндотелиоцитов в периферической крови. Увеличение количества слущенных эндотелиоцитов в периферической крови наблюдается при прогрессировании дисфункции эндотелия, при любом повреждении стенки сосуда. Цель исследования: сравнить процент ЭПК и слущенных эндотелиоцитов от общего количества клеток лимфоцитарной фракции у пациентов с ГБ 2-3-й степени и практически здоровых лиц и оценить экспрессию рецепторов вазопрессина на ЭПК. Материал и методы: Протокол исследования одобрен локальным этическим комитетом Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого. Критерии включения в исследование: возраст от 40 до 71 года, установленный диагноз ГБ II или III стадии в соответствии с рекомендациями Российского кардиологического общества по диагностике и лечению АГ 2013 г., 2-я или 3-й степень АГ, подписанное добровольное информированное согласие. Критерии исключения: вторичная АГ, онкологические заболевания, заболевания почек, сахарный диабет, бронхиальная астма, эндокринная патология, системные заболевания соединительной ткани, курение на момент включения в обследование. До включения в исследование у всех пациентов исследуемой группы была исключена вторичная АГ на основании жалоб, анамнеза, объективного осмотра, измерения АД на верхних и нижних конечностях, ультразвукового исследования почек и надпочечников, дуплексного сканирования с цветовым допплеровским картированием сосудов почек, биохимического анализа крови, общего анализа мочи и суточного анализа мочи на катехоламины. Клиническая характеристика исследуемых групп представлена в табл. 2. Проведены клинический осмотр, измерение АД, электрокардиография, трансторакальная допплер-эхокардиография, биохимический анализ крови, у всех пациентов проведен забор 4 мл венозной крови для выделения ЭПК, выполнено иммуноцитохимическое исследование методом комбинированного окрашивания (анализ коэкспрессии 3 антигенов, иммунофлюоресцентный вариант) с использованием первичных и первично-меченых (mouse monoclonal anti-CD31 antibody; rabbit anti-AVPRV2; PE anti-CD133 antibody) и вторичных (donkey anti-mouse IgG Alexa Fluor 405; goat anti-rabbit IgG Alexa Fluor 647) антител. Микроскопирование препаратов проводили на автоматизированном конфокальном лазерном сканирующем микроскопе с водной иммерсией Olympus FV10i. Клетки подсчитывали в 10 полях зрения при увеличении 600-6000 (за счет оптического и цифрового увеличения). Увеличение 6000 использовали для фототрассирования отдельных ЭПК, которые идентифицированы как CD31+CD133+клетки, слущенные эндотелиоциты - как CD31+CD133-. Подсчитывали процент ЭПК от общего количества клеток лимфоцитарной фракции, процент слущенных эндотелиоцитов от общего количества клеток лимфоцитарной фракции. Перед началом анализа все вариационные ряды тестировали на нормальность с помощью расчета статистики Колмогорова-Смирнова. Так как распределение признаков было отличным от нормального, применяли непараметрические методы статистики. Количественные данные представлены в виде медианы и межквартильного интервала - Me (25%; 75%). Для множественных сравнений применяли критерий Краскела-Уоллиса. Последующие попарные сравнения проводили с использованием критерия Манна-Уитни. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Результаты и обсуждение Исследуемая и контрольная группы были сопоставимы по возрасту. Возраст обследуемых лиц контрольной группы составил 59 (53; 65) лет, возраст исследуемой группы - пациентов с ГБ 2-й степени - 58 (51; 60) лет, с ГБ 3-й степени - 61 (54; 64) год. Сравнения 3 групп по возрасту проводились с использованием критерия Краскела-Уоллиса, статистически значимых различий по возрасту пациентов и длительности ГБ между группами не выявлено. Нами выделены ЭПК. При множественном сравнении 3 групп (контрольная, пациенты с ГБ 2-й степени, пациенты с ГБ 3-й степени) с использованием критерия Краскела-Уоллиса установлено, что между группами существуют статистически значимые различия по проценту ЭПК от общего количества клеток лимфоцитарной фракции (р=0,012), и по проценту слущенных эндотелиоцитов от общего количества клеток лимфоцитарной фракции (р=0,013). В дальнейшем проводили попарные сравнения с использованием критерия Манна-Уитни. Выявлено, что процент ЭПК (фенотип CD31+CD133+) от общего количества клеток лимфоцитарной фракции у пациентов с ГБ 2-й степени (р=0,013) и у пациентов с ГБ 3-й степени статистически значимо выше, чем у здоровых лиц (р=0,008; табл. 3). Различий по проценту ЭПК от общего количества клеток лимфоцитарной фракции у пациентов с ГБ 2-й и 3-й степени не выявлено (p=0,721). Кроме того, установлено, что процент слущенных эндотелиоцитов (фенотип CD31+CD133-) от общего количества клеток лимфоцитарной фракции у пациентов с ГБ 2-й (р=0,008) и у пациентов с ГБ 3-й степени статистически значимо выше, чем у здоровых лиц (р=0,019; см. табл. 3). До сих пор ведутся дискуссии о том, какой уровень ЭПК (высокий или низкий) в периферической крови является предиктором сердечно-сосудистых осложнений. N. Werner и соавт. в ходе годичного исследования, в котором использовался фенотип ЭПК CD34+KDR+, установили, что более высокое содержание ЭПК в периферической крови ассоциировалось с низким риском сердечно-сосудистой смертности. В то же время, по результатам 5-летнего проспективного исследования, проведенного итальянскими учеными F. Pellicia и соавт., в котором использовались иные фенотипы (CD34+KDR+CD45 и CD133+KDR+CD45), установлено, что повышенное количество ЭПК в периферической крови ассоциировалось с увеличением частоты развития сердечно-сосудистых осложнений, таких как смерть, острый инфаркт миокарда, инсульт. В исследовании G. Waclawovsky и соавт. установлено, что у здоровых лиц, не занимавшихся физическими упражнениями до исследования, уровень ЭПК снижался после проведения аэробных упражнений. Результаты нашего исследования свидетельствуют, что при ГБ 2-й и 3-й степени уровень ЭПК в плазме крови статистически значимо повышается. Мы считаем, что повышение процента ЭПК в периферической крови при ГБ свидетельствует о компенсаторной реакции организма в ответ на развитие дисфункции эндотелия, а повышение процента слущенных эндотелиоцитов - о повреждении эндотелия. До проведения нашего исследования было известно, что V2-рецепторы вазопрессина находятся на базолатеральной мембране клеток собирательных трубочек почек и клеток восходящего отдела петли Генле. V2-рецепторы вазопрессина представляют собой классические мембранные рецепторы, через которые вазопрессин реализует свой антидиуретический эффект. В нашем исследовании впервые выявлена локализация V2-рецептора вазопрессина (AVPRV2) на мембране ЭПК. На фотографии, сделанной конфокальным микроскопом, видно, что ЭПК имеет поверхностные маркеры CD31 (маркер эндотелиальных клеток), CD 133 (маркер стволовых клеток) и V2-рецептор вазопрессина. По нашему мнению, локализация V2-рецептора вазопрессина на мембране ЭПК свидетельствует о влиянии вазопрессина на развитие дисфункции эндотелия. Заключение У пациентов с гипертонической болезнью 2-3-й степени значительно повышается процент эндотелиальных прогениторных клеток и слущенных эндотелиоцитов от общего количества клеток лимфоцитарной фракции. В нашем исследовании впервые выявлена локализация V2-рецептора вазопрессина на мембране эндотелиальных прогениторных клеток. Эти новые данные свидетельствуют о влиянии вазопрессина на дисфункцию эндотелия, что позволит в дальнейшем использоватьV2-рецептор вазопрессина на эндотелиальных прогениторных клетках как новую мишень для антигипертензивных препаратов и эндотелиопротекторов.

Авторы:

Издание: Кардиология
Год издания: 2018
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2018.-N 5.-С.41-47. Библ. 28 назв.
Просмотров: 59