Сравнительная оценка микробиоценозов отделяемого цервикального канала и эякулята в супружеских парах

Аннотация:

Цель исследования — сравнительная оценка микробиоценозов отделяемого цервикального канала и эякулята в супружеских парах методом стандартного бактериологического посева и методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с применением тест-систем «Андрофлор» у мужчин и «Фемофлор» у женщин. Проведен ретроспективный анализ историй болезни 154 семейных пар, обратившихся к врачу для проведения прегравидарной подготовки. Все пациенты были разделены на 2 группы: у 121 супружеской пары выполнен стандартный бактериологический посев отделяемого цервикального канала и эякулята, а у 33 пар анализ эякулята и отделяемого цервикального канала проводился методом ПЦР-РВ с использованием тест-систем «Андрофлор» и «Фемофлор». В результате моноинфекция встречалась статистически значимо чаще в эякуляте, чем в отделяемом цервикального канала (р <0,05). У женщин статистически значимо чаще, чем у мужчин, посевы идентифицировались как стерильные (р — 0,01). По результатам стандартного бактериологического исследования микробиоценозы отделяемого цервикального канала и эякулята в супружеской паре полностью не совпадали по составу микроорганизмов в большинстве наблюдений (69,4 %) и совпадали всего в 18,2 % случаев. При оценке методом ПЦР-РВ микробиоценозы эякулята и отделяемого цервикального канала не совпадали по составу микроорганизмов в 48 % наблюдений. Заключение. Проведенное исследование демонстрирует уникальность микробиоценозов урогенитальных трактов супругов и свидетельствует о необходимости обследования обоих партнеров на этапе прегравидарной подготовки, а также о недопустимости назначения им одинакового лечения. Прегравидарная подготовка включает комплекс диагностических, профилактических и лечебных мероприятий, направленных на оценку состояния здоровья половых партнеров и их подготовку к зачатию, хотя, к сожалению, на сегодняшний день в Российской Федерации не более 4 % супружеских пар проходят ее. Общепризнано, что прегравидарная подготовка влияет на последующее вынашивание беременности и способствует рождению здорового ребенка. В прегравидарную подготовку супругов входит бактериологический анализ отделяемого цервикального канала и эякулята. Согласно систематическому обзору и метаанализу, включившему 4712 научных статей за 56 лет, инфекционные агенты, выявленные в урогенитальном тракте матери, увеличивают частоту осложнений беременности, в том числе преждевременных родов, перинатальную и детскую заболеваемость. В структуре причин мужского бесплодия, по данным литературы, урогенитальные инфекции занимают от 6,6 до 32,0 %. Наиболее изученными микроорганизмами сегодня считаются Enterococcus spp. и Enterobacteriaceae, в частности Е. coli, которая снижает подвижность и ухудшает морфологические показатели сперматозоидов и вызывает неспецифические воспалительные заболевания мочеполовой сферы у женщины, которые становятся причиной невынашивания. Enterococcus spp. наиболее часто выявляется в эякуляте у мужчин с бесплодием и, по нашим данным, в первичных посевах спермы «экранирует» истинную патогенную флору, этиологически значимую для возникновения воспалительного процесса в предстательной железе. Большинство пациентов, а также часть врачей не уделяют должного внимания мужскому фактору супружеского бесплодия, и часто в рамках прегравидарной подготовки гинеколог требует от мужчины только результаты спермограммы, в отдельных случаях — результаты анализов на инфекции, передающиеся половым путем, если таковые были обнаружены у партнерши. В общественном сознании и врачебном сообществе по-прежнему превалирует мнение о том, что микробиоценозы урогенитальных трактов супругов совпадают, и если у одного из них выявлен какой-либо микроорганизм, то он обязательно присутствует и у полового партнера. Часто именно на этапе прегравидарной подготовки после обнаружения инфекционного агента в мочеполовом тракте одного из супругов врач назначает одинаковую терапию обоим, и второй супруг, таким образом, получает ее необоснованно. В литературе нам не встречалось публикаций, посвященных сравнению микробиоценозов отделяемого цервикального канала и эякулята у половых партнеров, которые не предъявляли жалоб, характерных для воспалительного процесса в урогенитальном тракте. Мы имеем опыт скринингового сравнительного анализа микробиоценозов цервикального канала и эякулята методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием тестсистем «Андрофлор» (у мужчин) и «Фемофлор» (у женщин) в супружеских парах, не предъявлявших жалоб и не имевших клинических проявлений воспалительного процесса в урогенитальном тракте [7]. Целью исследования стала сравнительная оценка микробиоценозов отделяемого цервикального канала и эякулята в супружеских парах с помощью стандартных бактериологических посевов и метода ПЦР-РВ с использованием тест-систем «Андрофлор» и «Фемофлор». Проведен ретроспективный анализ историй болезни 154 семейных пар, обратившихся для прегравидарной подготовки в урологическую клинику Ивановской государственной медицинской академии в период с 2012 по 2017 г., в том числе с привычным невынашиванием беременности или бесплодием. Все пациенты в течение последних 4 нед не получали антибактериальных препаратов, не пользовались барьерной контрацепцией и не предъявляли жалоб, характерных для воспалительных заболеваний мочеполовой сферы. Из исследования были исключены пациенты, в урогенитальном тракте которых по результатам ПЦР и ПЦР-РВ обнаружены Ureaplasma spp., Mycoplasma spp., Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis, Gardnerella vaginalis, Neisseria gonorrhoeae. Пациенты были разделены на 2 группы: у 121 супружеской пары в 2014—2016 гг. отделяемое цервикального канала и эякулят исследованы стандартными бактериологическими методами, а у 33 пар в 2016— 2017 гг. — методом ПЦР-РВ с помощью тест-систем «Андрофлор» (у мужчин) и «Фемофлор» (у женщин). Средний возраст мужчин в 1-й группе составил 32,7 ± 6,8 года, женщин — 30,3 ± 5,6 года, во 2-й группе — 36,4 ± 7,6 и 33,7 ± 6,6 года соответственно.Материал забирали в стерильных условиях в специально подготовленную транспортную среду и доставляли в бактериологическую лабораторию в течение 1 ч с момента забора. Пациенты собирали эякулят методом мастурбации, предварительно они мочились и проводили тщательный туалет наружных половых органов с мылом. Перед взятием материала из цервикального канала ватным тампоном удаляли слизь, затем шейку матки обрабатывали стерильным физиологическим раствором. Зонд вводили в цервикальный канал на глубину 0,5—1,5 см, при извлечении зонда исключалось касание стенок влагалища. Обязательным условием перед забором эякулята и отделяемого цервикального канала было воздержание супругов от половой жизни не менее 3 сут для исключения контаминации флоры партнера. Бактериологические анализы выполнялись на базе бактериологической лаборатории ОБУЗ «Противотуберкулезный диспансер им. М.Б. Стоюнина» г. Иванова. Процедуры посева на питательные среды, выделения и идентификации культур соответствовали регламентирующим нормативным документам. При работе с тест-системами «Андрофлор» (регистрационное удостоверение № РЗН 2016/4490) и «Фемофлор» (регистрационное удостоверение МЗ CP РФ ФСР 2010/08810) использовался детектирующий амплификатор ДТ-96 производства ООО «НПО ДНК-Технология» (Россия, Москва). Для микробной флоры диагностически значимым титром считали более 1000 колониеобразующих единиц в 1 мл (КОЕ/мл), согласно рекомендациям Европейской ассоциации урологов (European Association of Urology) 2017 г. Статистический анализ проведен с использованием пакета прикладных программ Microsoft Excel 2013 и Statistica 10.0 (StatSoft, Inc., США). Статистическую значимость различий анализировали с помощью критерия Фишера, различия считали значимыми при р <0,05. По данным бактериологических посевов в эякуляте выявлено 129 штаммов микроорганизмов, а в отделяемом цервикального канала — 102 штамма. В целом, как видно из рис. 1, эякулят был более инфицирован, чем отделяемое цервикального канала, при этом у мужчин моноинфекция встречалась в большем количестве случаев (р <0,05), чем у женщин. При статистическом анализе частоты встречаемости идентифицированных микроорганизмов в отделяемом цервикального канала и эякуляте статистически значимых совпадений между ними не выявлено (рис. 2). Стерильные посевы статистически значимо чаще (р = 0,01) встречались у женщин, чем у мужчин, что, вероятно, связано с физиологическими особенностями полового тракта женщин. Лактобактерии идентифицированы у каждой третьей обследованной (см. рис. 2). На рис. 3 видно, что наиболее часто в значимых титрах как у мужчин, так и у женщин встречались Еnerococcus spp., а из семейства энтеробактерий — Е. coli, что не противоречит данным литературы. Различием было то, что в эякуляте статистически значимо чаще, чем в отделяемом цервикального канала, встречались Staphylococcus spp. (р <0,05), а в отделяемом цервикального канала — Lactobacillus spp. (р <0,05). Частота выявления других микроорганизмов статистически значимо не различалась. В цервикальном канале и эякуляте в большинстве случаев микроорганизмы высеивались в значимом титре (114 и 88 случаев), при этом статистически значимых различий также не обнаружено. Стоит отметить, что из семейства Enterobacteriaceae у женщин была обнаружена только Е. coli, тогда как у мужчин это семейство было представлено помимо Е. coliтакими микроорганизмами, как Enterobacterspp. (3,8 %),Citrobacterspp. (3,8 %), Pseudomonasspp. (1,6 %), Proteus spp. (0,8 %), Morganella (0,8 %), Aeromonas (1,6 %) и Acinetobacter (0,8 %). Под нормой мы понимали отсутствие как в эякуляте, так и в цервикальном канале роста микроорганизмов (6,6 %), а также отсутствие роста микрофлоры в эякуляте супруга и рост лактобактерий в цервикальном канале супруги (5,8 %). В 69,4 % случаев микробиоценозы отделяемого цервикального канала и эякулята полностью не совпадали. Полное совпадение по составу высеянных микроорганизмов обнаружено только в 18,2 % случаев. По результатам теста «Фемофлор» присутствие в цервикальном канале Lactobacillus spp. выявлено в 32 (96,9 %) случаях, при этом в 44 % наблюдений Lactobacillus spp. встречались в ассоциации с другими микроорганизмами (рис. 4). По результатам теста «Андрофлор» в 4 (12,1 %) наблюдениях в эякуляте присутствовала нормальная микрофлора, представленная условно-патогенными микроорганизмами Staphylococcus spp., Streptococcus spp. и Corynebacterium spp. У 13 (39,4 %) мужчин микроорганизмы в эякуляте не обнаружены. Дисбиоз эякулята выявлен у 16 (48,5 %) мужчин. Спектр идентифицированных с помощью метода ПЦР-РВ микроорганизмов и их средний титр в цервикальном канале и эякуляте представлен на рис. 4 и 5 соответственно. В цервикальном канале, по сравнению с эякулятом, статистически значимо чаще встречались Lactobacillus spp. (р <0,05); частота выявления других микроорганизмов статистически значимо не различалась. Рис. 6 демонстрирует малое число совпадений микроорганизмов, выявленных в цервикальном канале и эякуляте супругов, при высокой встречаемости микроорганизмов в одном из этих биотопов. При оценке общности микробиоценозов отделяемого цервикального канала и эякулята в 9 (27,3 %) наблюдениях у супругов выявлены совпадения 1 и более микроорганизма, при этом в 16 (48,5 %) случаях микробиоценозы эякулята и цервикального канала полностью не совпадали ни по одному микроорганизму. Только у 8 (24,2 %) семейных пар по результатам ПЦР-РВ определена абсолютная норма — присутствие только Lactobacillus spp. в цервикальном канале у супруги и отсутствие микроорганизмов в эякуляте супруга. Наше исследование демонстрирует разнообразие микроорганизмов и низкий уровень совпадений между составом микроорганизмов в отделяемом цервикального канала и эякуляте, выявленных методами стандартного бактериологического посева и ПЦР-РВ, что, по нашему мнению, свидетельствует об индивидуальности микробиоценозов урогенитальных трактов супругов, несмотря на то что они длительный период времени не предохранялись. Отсутствие роста микрофлоры в цервикальном канале и наличие лактобактерий не гарантируют нормобиоценоз у женщины. По данным J. Ravel и соавт., у женщин репродуктивного возраста, считавших себя здоровыми, дисбиоз влагалища выявлен методом полного генетического секвенирования в 10,3 % случаев в европеоидной группе, 19,8 % в азиатской группе, 38,1 % в латиноамериканской и 40,6 % случаев в афроамериканской группе. При обследовании 234 жительниц Екатеринбурга методом ПЦР-РВ с помощью тест-системы «Фемофлор» и проведения количественного анализа 6 видов лактобактерий дисбиоз влагалища был выявлен в 19,7 % случаев. В современных клинических рекомендациях обследование мужчин, страдающих бесплодием и/или проходящих прегравидарную подготовку, включает бактериологический анализ эякулята, секрета предстательной железы или постмассажной порции мочи, но во многих случаях мужчины отказываются от массажа простаты с целью забора биологического материала для исследования, поэтому остаются недообследованными. Практически все пациенты готовы вместо секрета предстательной железы сдать эякулят на бактериологический анализ. По нашему мнению, более предпочтительно выполнять исследование методом ПЦР-РВ у супружеских пар, проходящих прегравидарную подготовку, так как методы рутинной диагностики как у мужчин, так и у женщин малоинформативны ввиду того, что многие микроорганизмы не растут на стандартных питательных средах, а период ожидания результатов бактериологических посевов очень длителен. Кроме того, правильность идентификации микроорганизмов напрямую связана с компетенцией врача-лаборанта. Заключение. Микробиоценозы цсрвикального канала и эякулята в супружеских парах в 69,4 % случаев по результатам стандартного бактериологического исследования и в 46 % случаев по результатам применения метода ПЦР-РВ не совпадают, что требует на этапе прегравидарной подготовки обязательного обследования обоих супругов, а также свидетельствует о недопустимости назначения одинакового лечения половым партнерам при выявлении микроорганизмов у одного из них.

Авторы:

Издание: Андрология и генитальная хирургия
Год издания: 2018
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2018.-N 2.-С.12-20. Библ. 16 назв.
Просмотров: 268