Влияние аллореактивности естественных киллерных клеток на эффективность аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток с деплецией а/р ТСК/С019+ лимфоцитов у педиатрических пациентов с острыми лейкозами

Аннотация:

Естественные киллеры (NK-клетки) - первая популяция лимфоцитов, которая восстанавливается после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Считается, что NK-клеточная аллореактивность определяется различием в активирующих и ингибирующих сигналах, посылаемых активирующими и ингибир/ющими иммуноглобулиноподобными рецепторами ИК-клеток. Лиганды для KIR-рецепторов - молекулы человеческого лейкоцитарного антигена (HLА); аллореактивность NK-клеток определяется KIR-HLА несоответствием между донором и реципиентом, а также наличием определенных активирующих KIR-генов. Результаты современных исследований свидетельствуют о влиянии на эффективность реакции «трансплантат против лейкоза» множества факторов, основные из них - подбор донора с учетом его KIR-генотипа и трансплантационный протокол. Цель исследования - оценка влияния KIR-генотипа естественных киллеров HLА-гаплоидентичных родственных и HLА-идентичных неродственных доноров на риск развития рецидива и выживаемость пациентов с острыми лейкозами после аллогенной трансплантации ГСК. В исследование включено 142 пациента (медиана возраста - 11 лет) с острым миелобластным лейкозом (п = 70) и острым лимфобластным лейкозом (п = 72), которым была проведена первая аллогенная неродственная (п = 64) или гаплоидентичная (п = 78) трансплантация ГСК с деплецией альфа/бета-Т-лимфоцитов в качестве процессинга трансплантата. Все пациенты на момент трансплантации ГСК находились в полной клинико-гематологической ремиссии, в качестве источника ГСК использовали стимулированные гранулоцитарным колониестимулирующим фактором стволовые клетки периферической крови. Полученные данные подтверждают современные представления о том, что наилучший эффект МК-аллореактивности зависит главным образом от трансплантационного протокола - вида режима кондиционирования, процессинга трансплантата и посттрансплантационной профилактики реакции «трансплантат против хозяина», поскольку это влияет на проявление потенциальной алпореактивности NK-клеток. При анализе влияния KIR-генотипа донора на эффективность трансплантации ГСК у пациентов с ОЛЛ выявлено снижение общей выживаемости пациентов с меньшим числом активирующих KIR-генов у донора - 0,31 (0,07-0,55) против 0,67 (0,53-0,81) у пациентов с большим их числом (р = 0,016). Статистически значимая разница при анализе данного фактора обнаружена также для безрецидивной выживаемости. При трансплантации ГСК от HLА-гаплоидентичных доноров потенциальная NK-аллореактивность доноров, предсказанная по модели «лиганд-лиганд», не оказала влияния на риск развития рецидива и выживаемость пациентов. При применении модели «рецептор-лиганд» наблюдалась тенденция к увеличению общей выживаемости пациентов в случае потенциальной ЫК-аллореактивности донора -0,76 (0,63-0,88) против 0,56 (0,32-0,81), р = 0,486. Рекомендуется учитывать данные KIR-Типирования при подборе гаплоидентичного донора для пациентов с острым лимфобластным лейкозом, поскольку большее количество активирующих KIR-генов (определяющее KIR В-гаплотип) у донора существенно улучшает общую и безрецидивную выживаемость. Иммуноглобулиноподобные рецепторы (К1Р) играют важнейшую роль в регуляции функциональной активности естественных киллеров (ЫК-клеток). К1ГС-система-высоко полиморфная, это проявляется в составе генов, их количестве, разнообразии аллельных вариантов и клональной экспрессии. Лигандами для ингибирующих К1Р-рецепторов являются антигены Н1_А I класса, лиганды большинства активирующих К1Р пока неизвестны. Аминокислотные остатки в позициях 76 (всегда содержащий валин) и 80 альфа-домена тяжелой цепи всех ША-С антигенов определяют К1Р-связывающие эпитопы: примерно половина аллелей несет аспарагин в 80 позиции, что определяет С1 эпитоп, взаимодействующий с ингибирующими К1Р20Ь2 и К1Р201_3, а оставшаяся половина - лизин, определяющий С2 эпитоп, взаимодействующий с К1Р201Л. Небольшой процент Н1_А-А антигенов и около половины известных на сегодняшний день Н1_А-В антигенов формируют В\л/4 группу в зависимости от аминокислотных остатков в позициях 77-83, которая связывается с ингибирующим К1Р201_3. Каждая ЫК-клетка экспрессирует множество ингибирующих и активирующих К1Р-рецепторов, связывание которых с соответствующими лигандами определяет функциональные последствия взаимодействия ЫК-клетки с потенциальной мишенью. Толерантность 1ЧК-клеток к собственным неповрежденным тканям организма приобретается в процессе так называемого «обучения» и «лицензирования», при котором в ходе созревания ЫК-клетки ее К1Р-рецеп-торы взаимодействуют с молекулами Н1.А I класса, вследствие чего исключается развитие аутореак-тивности. Однако при вирусной инфекции или опухолевой трансформации клетки экспрессия молеку; Н1.А I класса часто снижается, что приводит к преобладанию сигналов от активирующих К1Р-рецепторое на ЫК-клетках и запуску механизмов цитотоксично сти. Это уникальное свойство ЫК-клеток описано кай: «т/55/лд зе//»-гипотеза, или гипотеза «отсутствия своего» [4]. ЫК-клетки - первая популяция лимфоцитов, № торая восстанавливается после аллогенной трансг плантации ГСК и может оказывать сильный эффеку «трансплантат против лейкоза», основанный на их аллореактивности. Для характеристики влияния взаимодействия ЫК-клеток и их лигандов на исход» аллогенной трансплантации ГСК предложены три модели. 1. Модель «лиганд-лиганд» основана на осог бенностях функционирования рецепторов 1МК-клеток и предполагает, что если у реципиента отсутствуют как минимум один или более К1Р-лигандов (аллели Н1.А I класса групп С1, С2 или В\л/4), которые имеются у донора, то донорские ЫК-кпетки будут алло(-реактивны по отношению к пациенту (потенциальная аллореактивность в направлении «трансплантат против лейкоза»). Данная модель была подтверждена экспериментальными исследованиями на мыш^х в университете Перуджи [5]. Отсутствие лигандов у реципиента необходимо, но недостаточно для формирования потенциально аллореактивных клонов ЫК-клеток. Необходимо также присутствие у донора гена, кодирующего ингибирующий рецептор к отсутствующему у реципиента лиганду. Поскольку популя-ционное исследование показало, что ингибирующие К1Р-гены присутствуют у 95% людей, предположение о наличии соответствующего К1В-рецептора у донора будет корректно на 95% [6, 7], а значит, определение К1ГС-генотипа донора повысит точность исследования. Данная модель не применима для трансплантаций, если донор и реципиент ША-идентичны. Однако для неродственных с несовпадением по Н1_А-В или НьА-С и для гаплоидентичных аллогенных трансплантаций ГСК эта модель применима [8]. 2. Модель «рецептор-лиганд» не принимает во внимание К1Р-лиганды донора, поэтому применима для любого вида аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Аллореак-тивность в данном случае достигается при наличии у донора К1Р-рецептора, к которому нет лиганда у реципиента. Эта модель основана на предположении, подтвержденном исследованием экспрессии «^-рецепторов на поверхности ЫК-клеток методом проточной цитометрии в ранний посттрансплантационный период. В первые 90 дней после трансплантации ГСК вновь развивающиеся ЫК-кпетки, экспрессирующие ингибирующие К1Р-рецепторы, временно могут быть аллореактивны к клеткам реципиента, не несущим соответствующие лиганды. В этот период такие ал-лореактивные клоны ЫК-кпеток могут оказывать такой же эффект, как в предыдущей модели. В последующем, когда костный мозг восстанавливается, ИК-кпетки проходят «обучение» и «лицензирование», аллореактивные клоны больше не образуются [6]. Частный случай данной модели - «т/зз/пд Идапй» («отсутствие лиганда»), это менее точная модель, в которой, по данным популяционного исследования, предполагается, что у большинства доноров имеются все ингибирующие К1К-гены, поэтому считается что при отсутствии хотя бы одного из лигандов у пациента (01, 02 или В\л/4) донор потенциально аллореакти-вен [8]. 3. Модель, анализирующая влияние отдельных К1Р-генов, а также общего количества К1Р-генов донора без учета ША-антигенов реципиента и донора. Эта модель наименее изучена; предполагается, что чем выше количество К1Р-рецепторов на ЫК-клетке донора, тем больше вероятность, что различие между К1Р-лигандами донора и реципиента будет определяться ЫК-кпетками [9]. Данные модели схематично представлены на рисунке 1. В данной работе проведена оценка влияния ал-лореактивности ЫК-клеток доноров в соответствии с тремя описанными моделям на риск развития рецидива, общую и безрецидивную выживаемость у пациентов с острым миелобластным лейкозом (ОМЛ) и острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), получивших гаплоидентичную и неродственную ал-логенные трансплантации ГСК с использованием селективного удаления (деплеции) а/(3-Т-лимфоци-тов из трансплантата. Данный метод профилактики реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) был разработан исходя из данных о существенной роли ЫК-клеток в контроле инфекций и предотвращении рецидива у пациентов с гемобластозами. Наиболее убедительные результаты о позитивном влиянии ЫК-клеток на исходы трансплантации ГСК были получены на модели гаплоидентичной трансплантации с использованием С034+ селекции как метода обработки трансплантата [5]. Деплеция а/р-Т-лимфоци-тов представляет собой новый метод процессинга, в результате которого в трансплантате сохраняются не только ГСК, но и большое количество эффекторов врожденного иммунитета, в первую очередь - зрелые ЫК-кпетки и у/8-Т-кпетки. Применение данного метода позволяет успешно выполнять трансплантацию ГСК от неродственных и гаплоидентичных доноров и сопряжено с низким риском отторжения и развития РТПХ [10-13]. Влияние К1Р-генотипа и ЫК-алло-реактивности в контексте нового метода обработки трансплантата исследованы в настоящей работе. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В анализ были включены 142 пациента с диагнозами «ОМЛ» (п = 70) и «ОЛЛ» (п = 72) с полной кпинико-гематологической ремиссией, получившие первую аллогенную трансплантацию ГСК от ША-гаплоидентичных родственных (п = 74) и Н1_А-идентичных неродственных (п = 68) доноров с де-плецией а/р-Т-лимфоцитов в качестве процессинга трансплантата на базе НМИЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева Минздрава России в период с января 2012 по июнь 2016 года. Характеристика пациентов и доноров представлена в таблице 1. 1-ИА-типирование. Всем донорам и реципиентам было проведено ЩА-типирование по пяти локусам: Н1_А-А. -В, -С, -0РВ1, -ООВ1 с помощью одной из следующих методик: полимеразная цепная реакция (ПЦР) с сиквенс-специфическими праймерами РСР-55Р (0/ешр 55Р АВ, Стокгольм, Швеция), секвенирова-ние по Сэнгеру, Зециепсе-Вазеб Тур'шд ЦпуИгодеп, США), высокопроизводительное секвенирование следующего поколения, N63 [ИвЗдо, бепОх, Нидерланды). Разнообразие методов связано с внедрением в лабораторию новых методик Н1_А-типирования в период исследования образцов пациентов. Для аллелей первого класса Н1.А-А*, -В* были определены эквивалентные им серологические группы (В\л/4 или В\л/6) согласно текущим данным ША О'юНопагу [14]. Е5се аллели I класса Н1_А-С* были поделены на группы С1 и С2 согласно современной классификации [14]. К1К-типирование и интерпретация результатов. Геномная ДНК была выделена из периферической крови доноров с помощью набора «АмплиПрайм ДНК-сорб-В» (ООО «НекстБио», Россия); К1К-гены доноров протипированы с помощью наборов 01егир 55Р К1В вепо1урюд кН (01егир 55Р АВ, Стокгольм, Швеция). Продукт ПЦР оценивали на 1%-м агароз-ном геле, окрашенном бромистым этидием. Вывод о наличии или отсутствии определенных К1Р-генов [2011, 2012, 2013, 2014, 2015А, 2015В, 2051, 2052, 2083, 2084, ЗОН, 3012, 3013, 3081) и двух псевдогенов (20Р1 и ЗйР1) делали на основании присутствия или отсутствия, по результатам электрофореза, фрагментов соответствующего молекулярного веса. К1Р-генотипы доноров были отнесены к одной из групп - А или/и В - в зависимости от присутствия и количества определенных активирующих и ингибиру-ющих генов и согласно геномной организации К1Р ло-куса [15]. Распределение доноров на группы в соответствии с их К1Р В-контентом («пеи1:га1», «ЬеИег», «ЬезН проводили с помощью К1Р В-соп1еп1 дгоир калькулятора [16]. Под В-контентом подразумевается количество центромерных и теломерных мотивов, содержащих гены, определяющие К1Р В-гаплотип. Выделяют три В-контента: нейтральный («пеи^га/») - донор, в гаплотипе которого полностью отсутствуют В-мотивы или присутствует только один, неважно в какой части (Те1В или СепВ); лучший [«ЬеИег») - донор, в гаплотипе которого присутствует один или более В-мотив, но не в центромерной части (не СепВВ, без гомозиготности в центромерной части по В-мотиву); наилучший («ЬезН - донор, в гаплотипе которого присутствует один или более В-мотивов и именно в центромерной части (с СепВВ]. Алло-реактивность донора оценивалаи по трем описанным моделям аллореактивности ЫК-кпеток. Кондиционирование и трансплантация. Всем пациентам было проведено миелоаблативное кондиционирование. Состав кондиционирования, серотерапия и профилактика РТПХ представлены в таблице 2. Источником трансплантата были мобилизованные гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (Г-КСФ) стволовые клетки периферической

Авторы:

Издание: Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии
Год издания: 2018
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2018.-N 2.-С.39-50. Библ. 22 назв.
Просмотров: 148