ОСОБЕННОСТИ БИОМАРКЕРОВ ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ГРИППЕ

Аннотация:

Анализ биомаркеров воспаления с использованием обратной транскрипции с ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ) и мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа хМАР на магнитных микросферах при гриппе. Анализ смывов носоглотки, лимфоцитов и сывороток крови 10 больных гриппом и 10 доноров проводили на 1 -2 сутки заболевания посредством ОТ-ПЦР-РВ и хМАРс набором «37-р1ех». В 4 смывах больных выявлен вирус гриппа А, в 6 — вирус гриппа В без смешанных инфекций с другими респираторными вирусами. Анализ интерферонов показал активацию экспрессии гена IFNа в лимфоцитах пациентов, а частоты детекции и концентрации РНК IFNбета, и IFNy, у больных и здоровых были сходными. Среди 37 биомаркеров воспаления выявлено повышенное содержание 7 белков, включая IFNальфа,бета, цитокины семейства TNF (АРRIL и ВАFF), рецепторы sТNF-RI и sТNF-R2, белок остеопонтин и интерлейкин IL10. Концентрации комплекса гликопротеина 130 с растворимым рецептором IL6gp130/sIL-6Rбета металлопротеиназы ММР-1 были пониженными убольных гриппом. Коэффициент поляризации КП=[IL10]/[IFNy]=0,53 при гриппе показал ТhI поляризацию иммунитета. На ранней стадии заболевания гриппом показана активация экспрессии гена IРNа, индукция цитокинов семейства ТИР (АРР1Ь и ВАРР) и их рецепторов ($Т1МР-К1 и $ТNР-К2), а также остеопонтина, ингибирование рецептора §р130/$1Ь-6К|3 и металлопротеазы ММР-1. ТЫ иммунитет с регуляцией 1Ы0 обеспечил восстановление пациентов без осложнений. Грипп — острая респираторная инфекция с риском осложнений, включая пневмонии, острую дыхательную недостаточность, инфекционно-токсический шок, менингиты, острый дистресс-синдром, а также декомпенсацию ; сопутствующих хронических заболеваний — бронхиальной астмы, хронической обструктивной болезни легких, заболеваний печени, почек, сердечно-сосудистой системы. По данным ВОЗ в мире ежегодно регистрируют 3 — 5 млн больных гриппом. Лечение гриппа основано на применении терапевтических препаратов | прямого действия — ингибиторов нейраминидазы (занамивира, озельтамивир I фосфата — Тамифлю), релензы и отечественного аналога «Номидес» произ- [ водства «Фармасинтез-Ритейл», а также амантадина и римантадина, направ- [ ленных на трансмембранную область белка М2 вируса гриппа, и индукторов I интерферонов (арбидола, кагоцела, циклоферона и др.). Однако возникнове- [ ние мутантных вариантов РНК-содержащего вируса гриппа, устойчивых к | действию этиотропных ингибиторов, и распространение иммунодефицитов среди населения обусловливают необходимость поиска новых противовирус- | ных средств и их комбинированного использования. При вирусной инфекции в результате презентации эндогенных антигенов в комплексе с основным комплексом гистосовместимости М НС-1 происходит | индукция экспрессии генов ТЫ. Показано, что инфекция вирусом гриппа типа А индуцирует ранние цитокины: ТNРа, 1Ыа и 1Ы(3, которые | являются ответственными за локальные воспалительные реакции. Позднее [ продуцируются Ш5, белки воспаления макрофагов М1Рв; хемокин 1Ь8, обе- I спешивающий хемотаксис нейтрофилов; белки-хемоатграктанты моноцитов МСРз. Ряд хемокинов КАМТЕ8, М1Р1а, МСР1, МСРЗ и 1Р10 индуцируют миграцию нейтрофилов или макрофагов в ткани. Полифункциональные цитокины IРNа, ТNРа, 1Ы и 1Ь6 ассоциируют с лихора- I дочным состоянием, слабостью, сонливостью и анорексией. Помимо этого, \ Т^а и 1Ь1 повышают уровень молекул адгезии на эндотелии кровеносных сосудов и, таким образом, стимулируют накопление нейтрофилов и макрофа- I гов в респираторном тракте. Помимо индукции врожденной резистентности и ТЫ поляризации преимущественно клеточного адаптивного иммунного ответа дисбаланс цитокинов при гриппозной инфекции может приводить к патогенному действию вслед- | ствие некроза тканей и увеличения проницаемости сосудов. Цитокиновые каскады, обусловленные синергичной активацией экспрессии генов цитокинов и плейотропностью их действия, могут приводить к нарушениям защитных систем организма и усилению патогенеза. Цель данного исследования: анализ биомаркеров воспаления с использованием обратной транскрипции с ПЦР в реальном времени и мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа хМАР на магнитных микросферах при гриппе. Обследование 17 пациентов Инфекционной клинической больницы № 1 проводили в НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи в феврале—марте 2015 г. Пациентов обследовали после поступления в стационар на 1 — 2 сутки заболевания согласно правовым аспектам оказания медицинской помощи с получением от них информированного письменного согласия. Группу сравнения составили 10 практически здоровых волонтеров 25 — 55 лет без клинических и лабораторно подтвержденных признаков респираторных заболеваний. Анализ носоглоточных смывов больных гриппом проводили посредством ОТ-ПЦР-РВ. Диагноз с идентифицикацией возбудителя ОРВИ (вирусов гриппаАи В) подтвержден посредством ОТ-ПЦР-РВ с использованием коммерческих наборов «Амплисенс® 1пЯиеп2а У1Ш8 А/В-РЬ», «АмплиСенс® 1пПиепга упиз А/Н1-з\уте-РЬ» и «АмплиСенс® 1пЯиепга уйиз А-тип-РЬ». Другие респираторные вирусы (РНКриновирусов, респираторно-синцитиаль-ного (РС) вируса, метапневмовируса, вирусов парагриппа 1, 2, 3 и 4 типов, коронавирусов видов ОС43, Е229, ТМЬбЗ, НКШ, ДНК аденовирусов групп В, С и Е и бокавируса) определяли с использованием набора «ОРВИ-АмплиСенс» («АмплиСенс», Москва). Количественное определение РНК IРN а, (3, уД в мононуклеарных клетках крови больных гриппом и здоровых доноров проводили посредством ОТ-ПЦР-РВ в соответствии с. Концентрации 37 биомаркеров воспаления определяли в сыворотке крови с использованием набора «Вю-Р1ех Рго™ Нитап 1пЯатта1:юп Рапе11 37-р1ех» на анализаторе МАСР1Х («ВюКас!», США). Статистическое сравнение выборочных долей и количеств цитокинов проводили с использованием критерия Стьюдента и ПО «ВюзШ». Принят уровень значимости различий при р<0,05. Идентификация юзбудителей респираторных инфекций в носоглоточных смывах 10 больных методом ОТ-ПЦР-РВ показала наличие вируса гриппа А(НЗЫ2) — у четырех, гриппа В — у шести больных. Среднетяжелое течение фиппа проходило с головной болью, ломотой, сухим кашлем вследствие трахеита, температурой 37,7°С. У 1 пациента грипп осложнился лакунарной ангиной. Необходимо отметить, что на начальных стадиях заболевания при среднетяжелом течении гриппа у обследуемых пациентов концентрации лейкоцитов и скорость оседания эритроцитов оставались в пределах физиологической нормы. Тест определения функциональной активности на культуре клеток фибробластов легких эмбриона человека, клетках почки зеленой мартышки Уего сывороточного и бессывороточного ведения выявил сниженные показатели продукции IРN 1 и 2 типов у больных гриппом. Так, способность к продукции 1РЫ 1 и 2 типов лейкоцитами крови больных гриппом составила 40 и 8 ед/мл; у практически здоровых людей в сезонный эпидемический период — 160 и 24 ед/мл соответственно. Анализ экспрессии генов 3 типов показал преимущества определения РНК в мононуклеарных клетках крови по сравнению с сыворотками как по общему количеству положительных образцов, так и по количественным оценкам. Для 1Р^были показаны как отличия частот детекции РНК в лимфоцитах больных (41,2±12,3%) и здоровых людей (26,7±11,8%), так и концентрации мРНКв 1 мл крови. Концентрации белка 1Р№2 также были достоверно выше. Содержание 1РТч1(3 в сыворотке крови больных гриппом и у здоровых не отличалось. Частота детекции РНК (50%) и белка (2,9 пг/мл) в крови у больных гриппом и у здоровых доноров (40% и 2,1 пг/мл, соответственно) были статистически сходными. Отмечена высокая частота (80 — 100%) и уровень экспрессии гена 1РМ^ у больных и здоровых. Необходимо отметить, что в соответствии с количественными оценками поданным ОТ-ПЦР-РВ и хМАР содержание белков превышало количество молекул соответствующих мРНК в единице объема крови, что могло быть обусловлено как каскадным усилением при трансляции, так и большей стабильностью белков по сравнению с РНК. Мультиплексный иммунофлуоресцентный анализ на магнитных микросферах 37 белков воспаления показал повышенное содержание 7 белков в крови больных гриппом по сравнению с показателями у здоровых добровольцев, к которым относятся 4 белка семейства 'ЖР, такие как АРКИ/ Т^5Р13 (Р<0,05), ВАРР/Т^$Р13В (Р<0,001), их растворимые рецепторы 8Т1МР-К1/$ТЫР-К2 (Р<0,05), атакже цитокины 1Р№2 (Р<0,05), 1Ы0 (Р<0,001), белок остеопонтин (Р<0,001). Концентрации двух маркеров: комплекса гли-копротеина 130 с растворимым рецептором 1Ь-6§р130/81 Ь-6К.(3 и матриксной металлопротеиназы ММР-1 у больных гриппом были пониженными (Р<0,05) по сравнению с контролем. Для оценки сбалансированности и направленности иммунного ответа определяли коэффициенты поляризации (КП) как соотношение концентраций 1Ы0 и в сыворотках крови больных гриппом и здоровых доноров, которые составили 0,53 и 0,07, соответственно. Данные свидетельствуют о ТЫ поляризации в результате эндогенной презентации антигенов при инфекции вирусами гриппа А и В в начале заболевания с последующей индукцией преимущественно клеточного иммунного ответа. В эпидемический сезон 2014 — 2015 гг. в Москве зарегистрирована одновременная циркуляция штаммов вирусов гриппа А(НЗЫ2) и В. Вирус гриппа В проявлял высокую активность в течение всего эпидемического сезона в отличие от его появления в весеннее время в предыдущие годы.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2018
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2018.-N 3.-С.67-73. Библ. 20 назв.
Просмотров: 97