Клинико-генетические параллели формирования истмико-цервикальной недостаточности при одноплодной беременности, наступившей в результате использования вспомогательных репродуктивных технологий

Аннотация:

Цель исследования — определить анамнестические и генетические предикторы формирования истмико-цервикальной недостаточности (ИЦН) при одноплодной беременности, наступившей в результате использования вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Материал и методы. Основная группа — 31 пациентка с ИЦН при беременности, наступившей в результате использования ВРТ. Контрольная группа — 41 пациентка без формирования ИЦН при беременности, наступившей в результате ВРТ. Проведен анализ акушерско-гинекологического, соматического анамнеза. Выполнено молекулярно-генетическое типирование полиморфных вариантов генов COL1A1 и VEGF-A, кодирующих белки, которые участвуют в формировании соединительной ткани и регуляции ангиогенеза. Результаты. Клинико-анамнестическими предикторами формирования ИЦН у беременных после ВРТ явились указание в анамнезе на 3 медицинских аборта и более, потеря беременности во II триместре и бесплодие неясного генеза (р<0,05). В основной группе статистически значимо чаше регистрировали вариантный аллель -1997А полиморфного локуса -1997С>А гена COL1A1 (р<0,05; относительный риск — ОР 3,27; 95% доверительный интервал — ДИ 1,01—10,29) и аллель -2578А полиморфного локуса -2578С>А гена VEGF-A (р<0,04; ОР 2,57; 95% ДИ 1,04—6,39). Выводы. Выявление клинико-анамнестических предикторов и молекулярно-генетическое тестирование полиморфизмов генов COL1A1 и VEGF-A у беременных с одноплодной беременностью, наступившей в результате использования ВРТ, позволит сформировать группу риска развития и невынашивания беременности во II триместре и направлять включенных в нее пациенток на дополнительную цервикометрию.Вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ) выходят на первый план в системе оказания помощи бесплодным парам. По данным отечественных и зарубежных авторов , ежегодно все большему количеству супружеских пар требуется применение методов ВРТ. Женщины, у которых беременность наступила в результате использования различных методов ВРТ, входят в группу высокого риска возникновения ге-стационных осложнений , в том числе поздних самопроизвольных прерываний беременности и сверхранних преждевременных родов. По данным зарубежных авторов , отношение шансов (ОШ) преждевременных родов составляет 1,26 при 95% доверительном интервале — ДИ 1,12—1,43. Невынашивание беременности во II триместре и сверхранние преждевременные роды могут быть связаны с не установленной вовремя и некорригированной истмико-цервикальной недостаточностью (ИЦН). По данным отечественных авторов , частота ИЦН при беременности после экстракорпорального оплодотворения составляет 20,6%, тогда как после спонтанной беременности — 4,4%. ИЦН вызывается структурными и функциональными изменениями истмического отдела матки. Известно, что шейка матки является динамической анатомической структурой, которая при беременности выступает как барьер между плодом и его внутриутробной средой и влагалищем. Она состоит преимущественно из коллагена и претерпевает серьезные структурные изменения при вынашивании беременности и подготовке к родам . Патогенез ИЦН изучен недостаточно. В последние десятилетия все больше авторов отводят важную роль дисплазии соединительной ткани (ДСТ) как одному из факторов риска развития ИЦН [9]. ДСТ — нутрициально и генетически детерминированное состояние, обусловленное нарушениями метаболизма соединительной ткани в эмбриональном и постэмбриональном периодах . Разнообразные точечные мутации, сопровождающиеся заменой даже одной аминокислоты, вызывают изменения биологических свойств коллагена, что в свою очередь приводит к проградиентности соединительнотканных нарушений на уровне тканей и организма. Расстройство процессов ремоделирова-ния соединительной ткани может быть обусловлено мутацией генов, кодирующих синтез и пространственную организацию коллагена и ответственных за формирование компонентов экстрацеллюлярного матрикса, а также ферментов, принимающих участие в процессах фибриллогенеза . ДСТ играет определенную роль в вынашивании беременности, наступившей в результате применения ВРТ . Однако работ по поиску клинических и генетических предикторов ИЦН у беременных после ВРТ на настоящий момент недостаточно, что и обуслови ло цель исследования. Цель исследования — определить анамнестиче ские и генетические предикторы формировани: ИЦН при одноплодной беременности, наступившей в результате использования ВРТ. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ. Проведено проспективное исследование с уча стием 72 пациенток, у которых беременность насту пила в результате использования ВРТ. Основна группа — 31 пациентка с ИЦН; контрольная групп — 41 пациентка без формирования ИЦН. Проведе ны анализ акушерско-гинекологического, соматиче ского анамнеза и балльная оценка степени выражен ности маркеров недифференцированной дисплазии соединительной ткани (нДСТ) по модифицирован ной шкале, разработанной Н.Е. Канн и соавт. Всем пациенткам проводили молекулярно-гене тическое типирование полиморфных вариантов ге нов, кодирующих белки, которые участвуют в фор мировании соединительной ткани (COLlAi —1997С>А, COL1A1: -1546G>T) и регуляции ангио генеза (VEGF-A: -2578С>А, VEGF-A: +936С>Т; ДНК выделяли из 0,5 мл венозной крови, взятой пробирку с этилендиаминтетраацетатом (ЭДТА) качестве антикоагулянта; использовали реагенты Проба ГС-Генетика (ООО «НПО ДНК-Технология>: Россия). Для оценки количества выделенной геном ной ДНК применяли набор реагентов контроля взя тия материала для метода полимеразной цепной ре акции (ПЦР) (ООО «НПО ДНК-Технология», Рос сия). Для исследования брали не менее 1,0 н геномной ДНК на реакцию. Генотипирование об разцов по аллельным вариантам исследуемых гено проводили методом аллель-специфичной ПЦР в ре жиме реального времени со снятием кривых плавле ния продуктов амплификации. Анализ результате ПЦР проводили в автоматическом режиме про граммного обеспечения детектирующего амплифи катора ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). Исследование одобрено комитетом по этик ФГБУ «Уральский научно-исследовательский ин ститут охраны материнства и младенчества» Мин здрава России (Екатеринбург). Статистический анализ данных осуществляли помощью пакета прикладных программ Statistica IX Различия между непараметрическими переменным определяли при помощи критерия Пирсона х2- Oi носительный риск оценивали по показателю OIL 95% ДИ. Нулевая гипотеза отвергалась при р<0,05. Тест на соответствие распределения генотипо закону Харди—Вайнберга в обеих выборках проводили с помощью критерия х2 с использованием прс граммы Hardy—Weinberg Equilibrium.РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Средний возраст пациенток основной группы составил 36±4,58 года, контрольной — 32±3,81 года. Хотя статистически значимых различий между группами не получено (р>0,05), следует отметить, что 64% пациенток основной группы находились преимущественно в старшем репродуктивном возрасте — от 35 лет до 41 года. Средний индекс массы тела у пациенток основной группы составил 22,9+4,12 кг/м2, контрольной — 23,1±4,15 кг/м2 (/р>0,05). Повторнородящими были 38,7% пациенток основной группы и 24% — контрольной (р>0,05). Большинство женщин основной группы имели аборты в акушерском анамнезе; причем в 9,7% случаев их было 3 и более, что чаще, чем у пациенток контрольной группы (р<0,05). Пациентки основной группы значительно чаще, чем пациентки контрольной группы, имели в анамнезе потери беременности во 11 триместре (12,9 и 2,4% соответственно; /КО,05). В 2 случаях произошло позднее самопроизвольное прерывание беременности на 18—19-й неделе и 20—21-й неделе, в 1 случае — сверхранние преждевременные роды на 24—25-й неделе и ранние преждевременные роды на 26—27-й неделе, что может свидетельствовать о формировании ИЦН во время предыдущих беременностей. Первобеременными были 29% пациенток основной группы и 46% — контрольной (р=0,05). При анализе структуры причин бесплодия обнаружено, что статистически значимо чаще выявлялось бесплодие неясного генеза (у пациенток основной группы оно встречалось в 19,3% случаев, тогда как у пациенток контрольной группы — в 4,9% (р0,05). Структура факторов, вызывающих развитие бесплодия в исследуемых группах, представлена на рис. 1. При балльной оценке степени выраженности фенотипических маркеров нДСТ у пациенток обеих групп статистически значимых различий не выявлено; однако обнаружена следующая тенденция: у 25% пациенток основной группы оценка составила более 10 баллов, что в 3 раза выше, чем у пациенток контрольной группы (7%). Таким образом, для выявления групп риска развития ИЦН недостаточно определения клинико-анамнестических предикторов. Необходимы дополнительные критерии для большей эффективности прогнозирования этого осложнения беременности. Результаты молекулярно-генетического типирования полиморфных вариантов генов, кодирующих белки, которые участвуют в формировании соединительной ткани (COL1A1: -19970А, COL1A1: —1546G>T) и регуляции ангиогенеза (VEGF-A: -2578С>А, K?GF-/1:+936C>T), свидетельствуют, что характер распределения аллелей и генотипов по полиморфным вариантам гена коллагена и фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в обеих группах соответствует равновесию Харди—Вайнберга. Анализ распределения генотипов по полиморфным маркерам исследуемых генов не выявил статистически значимых различий между пациентками основной и контрольной групп (рис. 2). Распределение частот аллелей по полиморфным локусам исследуемых генов (табл. 1) показало; статистически значимые различия в частотах полиморфных маркеров COL1A1: — 1997С>А и VEGF-A: —25780А. У женщин основной группы вариантный аллель — 1997А гена COL1A1 регистрировали статистически значимо чаще, чем у женщин контрольной группы (/р0,05; ОР 3,27 при 95% ДИ 1,01-10,79). У пациенток контрольной группы, напротив, была выше частота аллеля COLlAh -1997С О<0,05; ОР 0,31 при 95% ДИ 0,99-0,09). Различий в частоте аллелей по полиморфному маркеру —1546G>T этого же гена в исследуемых группах не выявлено. При сравнительном анализе распределения частот аллелей по полиморфным маркерам VEGF-A. -25780А и +936С>Т гена VEGF у женщин основной группы выявлена статистически значимо большая, чем у женщин контрольной группы, частота полиморфизма VEGF-A: -25780А (р<0,04; ОР 2,57 при 95% ДИ 1,04—6,39). Частота генотипов и алл лей по полиморфным локусам K?'G/;'-^:+936C>T6ui ли сходными у пациенток обеих исследуемых групп (см. табл. 1).Для оценки возможного влияния генотипа на риск формирования ИЦН использована доминантная модель распределения частот генотипов по исследуемым полиморфным маркерам изучаемых генов у пациенток основной и контрольной групп. Полученные результаты анализа распределения генотипов выявили значимость полиморфного маркера COL1A1: — 1997С>А в риске формирования ИЦН: вариантный аллель — 1997А можно расценивать как аллель «риска» развития данной патологии, так как его присутствие в генотипе в гомо- или гетерозиготном состоянии увеличивает шанс формирования ИЦН (р<0,03; ОР 4,40 при 95% ДИ 1,11-17,44). Генотип COL1A1: -1997СС, наоборот, дает протективный эффект в отношении ИЦН (р<0,03; ОР 0,23 при 95% ДИ 0,90-0,06) (табл. 3). Ген COL1A1 кодирует аминокислотную последовательность цепи альфа-1 белка коллагена I типа. Молекула коллагена I типа состоит из трех полипептидных цепей (альфа-цепи). Мономер коллагена имеет структуру тройной спирали, которая придает коллагену I типа многие из его уникальных свойств. Мутации, которые влияют на образование стабильной тройной спирали, не позволяют коллагену организовываться в волокна, что приводит к функциональным дефектам соединительной ткани. Полиморфизм в регуляторной области гена COL1A1 —1997А>С приводит к изменению соотношения цепей альфа-1 и альфа-2 и к нарушению структуры коллагена. Установлено, что вариант ал-леля —1997С ведет к повышению уровня транскрипции гена COL1A1 и гиперпродукции цепи ар что приводит к дезорганизации соединительной ткани . Полученные нами результаты ассоциации риска формирования ИЦН с вариантным аллелем COL1A1 —1997С позволяют предполагать наличие генетической предрасположенности к ДСТ как фактора риска развития ИЦН при беременности. Центральная роль в регуляции ангиогенеза принадлежит семейству близких между собой по структуре белков — VEGF. Наиболее изученным представителем этого семейства является VEGF-A, который контролирует морфогенез кровеносных сосудов, в то время как VEGF-D и VEGF-C ответственны за образование лимфатических сосудов. Экспрессия гена VEGF-A регулируется различными факторами. По данным ряда исследователей, полиморфизм промоторного региона гена VEGF-A в позиции —2578А>С ассоциирован с уровнем экспрессии VEGF-A. Аллель —2578С связан с высоким уровнем экспрессии продукта. По данным Л.M. Комиссаровой, генотип 2578СС является протектив-ным в отношении формирования нДСТ, в то время как генотип АА ассоциирован с повышением риска развития нДСТ . Выполненные нами исследования возможной взаимосвязи полиморфных маркеров гена VEGF-A-. -2578С>А и +936С>Т с риском формирования ИЦН выявили ассоциацию вариантного аллеля —2578А гена VEGF-A с данной патологией. Альтернативный аллель —2578С дает протективный эффект в отношении формирования ИЦН. ВЫВОДЫ 1. Клинико-анамнестическими предикторами ИЦН у беременных после применения вспомогательных репродуктивных технологий с одноплодной беременностью являются: 3 медицинских аборта и более в анамнезе, указание в анамнезе на потери беременности во II триместре, бесплодие неясного ге-неза 2. Генетическим предиктором риска формирования истмико-цервикальной недостаточности при одноплодной беременности, наступившей в результате применения вспомогательных репродуктивных технологий, является вариантный аллель —1997А полиморфного локуса -1997С>А гена COL 1А1, так как его присутствие в генотипе в гомо- или гетерозиготном состоянии увеличивает шанс формирования истмико-цервикальной недостаточности (/КО,05; ОР 3,27 при 95% ДИ 1,01-10,79). Генотип COL1A1: -1997СС, наоборот, дает протективный эффект в отношении истмико-цервикальной недостаточности (/><0,03; ОР 0,23 при 95% ДИ 0,9-0,06). 3. Статистически значимым фактором риска формирования истмико-цервикальной недостаточности является полиморфизм —2578С>А гена фактора роста эндотелия сосудов: у пациенток основной группы частота аллеля —2578А выше, чем у пациенток контрольной (/><0,04; ОР 2,57 при 95% ДИ 1,04-6,39). 4. Для выявления риска формирования истмико-цервикальной недостаточности при одноплодной беременности, наступившей после применения вспомогательных репродуктивных технологий, целесообразно оценивать клинико-анамнестические данные пациентки, фенотипические маркеры дис-плазии соединительной ткани у беременной и рекомендовать молекулярно-генетическое типирование полиморфных вариантов генов: локуса — 1997С>А гена COL1A1 и локуса -2578С>А гена VEGF-A.

Авторы:

Издание: Проблемы репродукции
Год издания: 2018
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2018.-N 3.-С.74-80. Библ. 15 назв.
Просмотров: 66