РАЗРАБОТКА И ОЦЕНКА КАЧЕСТВА НОВОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКОВ ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Аннотация:

Проведена оценка качества разработанной экспериментальной питательной среды на основе отечественных компонентов и питательной среды для турбидиметрии, рекомендованной зарубежными фармакопеями. Результаты сравнительного исследования биологических и физико-химических показателей качества сред позволяют сделать вывод о возможности использования экспериментальной питательной среды для оценки содержания действующего вещества в лекарственных средствах на основе антибиотиков турбидиметрическим методом. Особое внимание всего мирового сообщества сегодня приковано к глобальной проблеме, с которой сталкивается человечество, - стремительное распространение устойчивости микроорганизмов. К появлению последних, помимо иррационального использования противомикробных препаратов, приводит также применение некачественных антибиотиков. В целях решения этой проблемы существенное внимание необходимо уделять обеспечению качества и клинической эффективности антибактериальных препаратов. В свою очередь, эффективность антибиотиков описывается с точки зрения активности, и точное ее измерение имеет решающее значение для безопасного и правильного использования антибиотиков. Поэтому очень важно количественное определение активного фармацевтического компонента в препаратах антибиотиков. Проведенный анализ отечественных и зарубежных монографий, регламентирующих качество антибиотиков, позволил установить, что в настоящее время ведущими зарубежными фармакопеями для оценки содержания действующего вещества в лекарственных средствах (ЛС) на основе антибиотиков в большинстве случаев используются микробиологические методы анализа, основанные на непосредственном биологическом действии антибиотиков в отношении подобранных высокочувствительных тест-микроорганизмов. Это объясняет большую информативность и объективность микробиологических методов по сравнению с химическими, так как они позволяют определить не только общее содержание антибиотиков, но и их активные формы. Именно поэтому микробиологические испытания рекомендованы в качестве арбитражных методов при разрешении сомнений, касающихся возможного снижения или потери активности антибиотиков. В Европейской (ЕР), Американской (USP), Британской (BP) и Индийской (Ind Р) фармакопеях используются две разновидности биологического тестирования: метод диффузии в агар и турбидиметрический метод. В отечественной фармакопейной практике (Фармакопеях СССР и ГФ РФ) применяется только диффузионный метод. Вместе с тем турбидиметрический метод анализа является наиболее перспективным, так как в сочетании с развитием инструментального оборудования, значительно сокращая временные и экономические затраты, обеспечивает получение высокоточных и достоверных результатов. С другой стороны, согласно общепринятым представлениям, питательные среды, составляя основу практически любого микробиологического исследования, нередко определяют своим качеством его результаты. Правильный подбор состава питательной среды является важным фактором при проведении испытаний по определению активности антибиотиков. Необходимо отметить, что питательные среды, используемые для количественного определения антибиотиков турбидиметрическим методом, должны удовлетворять следующим требованиям: • обеспечивать хорошие условия для роста микроорганизмов; • быть прозрачными; • иметь цветность от светло-желтой до желтой. Из обзора литературы и нормативной документации ясно, что для оценки содержания действующего вещества в лекарственных средствах на основе антибиотиков турбиди-метрическим методом применяют ограниченное количество сред. Так, в Американской и Индийской фармакопеях это среда для антибиотиков №3, в Европейской фармакопее -среда «С». Данные среды в качестве белковой оснэвы содержат пептон, имеют аналогичный компонентный состав, отличаясь между собой лишь количественным содержанием отдельных ингредиентов. Цель исследования - разработать состав отечественной питательной среды для количественного определения антибиотиков турбидиметрическим методом, а также провести оценку качества разработанной экспериментальной питательной среды на основе отечественных компонентов и питательной среды для турбидиметрии, рекомендованной зарубежными фармакопеями. При разработке компонентного состава экспериментальной питательной среды (ЭПС) использовали белковые гидролизаты отечественного производства: панкреатический гидролизат казеина (ПГК) по ТУ 9229-240-78095326-201 б, гидролизат мяса ферментативный (ГМФ) по ФСП 42-0487-4245-03. Источниками углерода, серы, витаминов группы В и микроэлементов в ЭПС служили экстракт кормовых дрожжей (ТУ 9385-090-14237183-08) и D-глюкоза (ГОСТ 6038-79). Для поддержания необходимого уровня осмо-тического давления, обеспечивающего жизнедеятельность микроорганизмов, в среду был добавлен натрия хлорид (ГОСТ 4233-77). В качестве среды сравнения использовали среду для антибиотиков №3 производства HiMedia Laboratories Pvt. Limited (Индия). Пропись данной среды полностью соответствует среде №3, рекомендованной для турбидлме-трического анализа USP и Ind Р. Питательные среды оценивали по физико-химическим показателям (рН, содержание аминного азота, хлоридов) и биологическим показателям (чувствительность, характер роста и стабильность морфологических признаков микроорганизмов) в соответствии с МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред». Для установления оксидазной и каталазной активности тест-микроорганизмов использовали наборы реагентов производства Becton Dickinson, США. При определении биологических показателей питательных сред использовали тест-штаммы Staphylococcus aureus АТСС 6f>38P, Klebsiella pneumoniae АТСС 13883, полученные из Государственной коллекции патоген ных микроорганизмов ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России, а также штамм Escherichia coli АТСС 8739, полученный из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГБУ «ГосНИИгенетики и селекции промышленных микроорганизмов НИЦ «Курчатовский институт». В качестве посевного материала использовали суточные культуры микроорганизмов, выращенные в соответствии с рекомендациями, изложенными в паспортах штаммов. Суспензии микроорганизмов для посева готовили в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида по отраслевому стандартному образцу (ОСО) мутности 42-28-85-П ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России. Полученные взвеси культур методом десятикратных разведений в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида доводили до необходимых концентраций и осуществляли посев на питательные среды. Принцип турбидиметрического метода -логарифмическая зависимость степени угнетения роста тест-микроорганизма в жидкой питательной среде от концентрации антибиотика. О задержке роста микроорганизмов судят по величине мутности среды. Следует отметить, что время, затраченное на проведение турбидиметрического анализа, напрямую связано с временем, необходимым для визуализации микробного роста. При таком подходе оптимизация времени инкубации может быть достигнута благодаря использованию: • богатой питательной среды, которая обеспечивает быстрый микробный рост; • свежей микробной культуры, полученйой в питательной среде, идентичной той, которая будет использована в анализе, с целью уменьшения лаг-фазы. Учитывая вышеописанные условия, а также тот факт, что одним из критериев, определяющих качество и эффективность питательных сред, является наличие в их составе стандартных белковых основ, на первом этапе конструирования ЭПС была проведена работа по выбору белковой основы. Казеин представляет собой белок, получаемый из обезжиренного молока и являющийся наиболее полноценным видом сырья для питательных сред. От других источников белка отличается постоянством состава и содержанием всех основных аминокислот и витаминов, в том числе и тех, которые отсутствуют в мясе и продуктах его переработки. Панкреатический гидролизат казеина (ПГК) получают с использованием ферментов поджелудочной железы, а именно - в процессе гидролиза происходит мягкое расщепление белков с образованием низкомолекулярных пептидов и отдельных аминокислот в доступной для усвоения микроорганизмами форме.

Авторы:

Издание: Вопросы обеспечения качества лекарственных средств
Год издания: 2018
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2018.-N 2.-С.21-26. Библ. 17 назв.
Просмотров: 86