ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ АЛЛЕРГИЗИРУЮЩИХ СВОЙСТВ ВОЛОДУШКИ ЗОЛОТИСТОЙ (BUPLEURUM AUREUM FISCH.) ЭКСТРАКТА СУХОГО

Аннотация:

Проведено экспериментальное изучение аллергенности сухого экстракта володушки золотистой (Bupleurum aureum Fisch. ex Hoffm.) в трех тестах: реакции общей системной анафилаксии, реакции активной кожной анафилаксии и реакции гиперчувствительности замедленного типа. Иммунизация морских свинок - альбиносов исследуемым сухим экстрактом в дозах 10 и 100 мг/кг по стандартной схеме или в смеси с полным адъюеан-том Фрейнда (ПАФ) не вызывала у животных системной реакции анафилаксии, активной кожной реакции и аллергической реакции замедленного типа. Одной из важнейших задач современной медицины является поиск новых эффективных лекарственных препаратов для терапии за болеваний гепатобилиарной системы, представляющих серьезную угрозу жизни населения. В настоящее время для лечения указанной патологии широко применяют препараты растительного происхождения, химический состав которых содержит флавоноиды. Они обладают широким спектром фармакологического действия, основным из которых является антиоксидантное, позволяющее инактивировать свободные радикалы и активные формы кислорода в клетке, что во многом обусловливает их высокую терапевтическую эффективность при лечении указанной патологии. Перспективным источником получения биологически активных веществ флавоноидной структуры являются растения рода Володушка (Bupleurum), которые имеют широкий ареал произрастания на территории России, что обеспечивает их стабильную сырьевую базу. В ранее проведенных исследованиях было установлено, что володушки золотистой экстракт сухой обладает выраженными гепатозащитными свойствами, и в настоящее время продолжается дальнейшее его фармакологическое и токсикологическое изучение. В соответствии с действующим законодательством, любому препарату, претендующему на рутинное клиническое применение, предъявляют требования, соответствующие его полной безопасности. Одним из таких требований является оценка аллергизирующих свойств, что и послужило целью данного эксперимента. Проведение подобных исследований и публикация их результатов становятся необходимыми, поскольку отсутствие таковых служит препятствием для клинического применения лекарственных средств, в том числе созданных на основе володушки золотистой экстракта сухого как одного из наиболее перспективных гепатопротекторов. В ФГБНУ ВИЛАР в настоящее время разработана оптимальная технология получения экстракта сухого володушки золотистой -Bupleurum longifolium subsp aureum (Fisch. ex Hoffm.) Soo, сем. Apiaceae - сельдерейные, основными биологически активными веществами которого являются флавоноиды-агли-коны лютеолина (0,3±0,01 мг/г), кверцетина (13,3±0,50 мг/г), кемпферола (1,1 ±0,10 мг/г), изорамнетина (9,1 ±0,30 мг/г). Кроме того, в составе экстракта установлено наличие феноль-ных соединений, сапонинов, полисахаридов, аскорбиновой кислоты, незаменимых и заменимых аминокислот. Стандартизацию сухого экстракта володушки золотистой проводили по содержанию суммы фенольных соединений в пересчете на рутин, количество которого составило не менее 7%. Целью настоящего исследования явилось экспериментальное изучение аллергизирую-щих свойств володушки золотистой экстракта сухого. Исследования выполнены на 48 морских свинках-альбиносах (самцы), 6-8-недельного возраста (масса тела 400-450 г), 20 мышах (самцы) линии BALB/c (масса тела 20-22 г.), полученных из питомника (филиал «Андреевка» ФГБУН НЦБМТ ФМБА, Московская область). Животных содержали в условиях вивария ФГБНУ ВИЛАР в соответствии с санитарными нормами, предусмотренными Правилами лабораторной практики. Содержание, кормление и уход за животными проводили в соответствии с Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Европейская конвенция, Страсбург, 1986). Экспериментальные группы животных формировали методом случайной выборки с учетом массы тела. Исследование проведено в соответствии с Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств (2012 г.). Выбор экспериментальных доз володушки экстракта сухого был обусловлен тем, что минимальная из испытанных доз - 10 мг/кг - соответствовала рекомендуемой суточной терапевтической, а доза 100 мг/кг - 10-кратной суточной терапевтической. Потенциальные аллергизирующие свойства володушки золотистой экстракта сухого были оценены с помощью следующих тестов: реакции общей системной и активной кожной анафилаксии и реакция гиперчувствительности замедленного типа. Для воспроизведения реакции общей системной анафилаксии животных контрольной (п=8) и двух опытных групп (п=16) иммунизи-роЕ5али согласно схеме: 1-я инъекция - под-кохно, 2-я и 3-я - внутримышечно, через день в область бедра. На 21-й день после начала сенсибилизации опытным животным в гесте общей анафилаксии внутривенно вводили разрешающую дозу экстракта, равную суммарной сенсибилизирующей, а контрольным - 0,9% раствор NaCI, после чего регистрировали развитие анафилактической реакции. Учет интенсивности проявления анафилактического шока проводили в индексах по \ZVeigle. При гибели всех животных в группе индекс Weigle составлял 4 (++++), при тяжелом шоке - 3 (+++), при умеренном шоке - 2 (++), при слабом шоке - 1 (+), при отсутствии анафилактоидных реакций у морских свинок индекс равен 0. В тесте активной кожной анафилаксии, проведенном на морских свинках-альбиносах (п=16), сенсибилизированным животным (согласно вышеуказанной схеме) на 21-й день от начала сенсибилизации внутривенно вводили 0,5 мл 1% раствора красителя синего Эванса. Через 20 минут после этого в предварительно выстриженный участок кожи вводили внутрикожно исследуемый экстракт в двукратном разведении в объеме 50 мкл. Для контроля реакции тому же животному на другой выстриженный участок кожи вводили 50 мкл стерильного 0,9% NaCI. Через 30 минут всех животных подвергали эвтаназии в С02-камере и на внутренней стороне кожи в месте введения тест-препарата и 0,9% NaCI (контроль п=8) определяли размер синего пятна. В тесте реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) на мышах линии BALB/c были созданы две экспериментальные группы по 10 животных в каждой: I группа - контроль (ПАФ с раствором Хенкса) в соотношении 1:1; II группа - володушки золотистой экстракт сухой, доза, эквивалентная 10 мМ раствору в ПАФ в соотношении 1:1. Оценку реакции ГЗТ проводили через 24 часа после разрешающей инъекции экстракта путем измерения величины отека лапок при взвешивании «контрольной» и «опытной» лапок с последующим расчетом индекса реакции (ИР) по формуле: ИР = Р -Р /Р • 100, где Р - масса опытной лапки, Р - масса контрольной лапки. После завершения экспериментальных исследований проведена статистическая обработка полученных результатов методом вариационной статистики с применением t-критерия Стьюдента. Достоверность различий с контролем считали при Р<0,05. Статистические данные обрабатывали с помощью программы Microsoft Excel. При оценке влияния экстракта володушки на развитие общей анафилактической реакции животных установлено, что при иммунизации свинок-альбиносов исследуемым экстрактом в дозах 10 и 100 мг/кг не развивалась реакция анафилаксии ни у одного животного из экспериментальных групп. Анафилактический индекс у морских свинок контрольной и опытных групп составил менее 1. Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что введение володушки золотистой экстракта сухого морским свинкам - альбиносам в дозах 10 и 100 мг/кг не вызывало реакции общей системной анафилаксии. В тесте реакции активной кожной анафилаксии после внутрикожного введения разрешающей инъекции володушки экстракта морским свинкам в обеих дозах диаметр окрашенного пятна в опытных группах статистически значимо не отличался от соответствующего значения в контроле. Таким образом, реакция активной кожной анафилаксии - отрицательная. При оценке действия экстракта володушки на развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа показано, что сенсибилизация мышей изучаемым экстрактом не потенцирует индекс реакции гиперчувствительности замедленного типа, величина которого не имеет статистически достоверных различий с аналогичным показателем животных контрольной группы. При изучении потенциальных аллергизирующих свойств володушки экстракта сухого в экспериментах на разных видах лабораторных животных не выявлены статистически значимые различия в результатах между контрольной и опытными группами. Исследуемый экстракт в диапазоне испытанных доз и схем сенсибилизации не вызывает реакции общей анафилаксии (анафилактический шок) и активной кожной анафилаксии, проведенных на морских свинках - альбиносах. Володушки экстракт, введенный с ПАФ, не потенцирует воспаление в реакции гиперчувствительности замедленного типа у мышей линии BALB/c. Таким образом, наши исследования показали, что володушки экстракт сухой не индуцируеталлергические реакции и по своей природе не является потенциальным аллергеном.

Авторы:

Издание: Вопросы обеспечения качества лекарственных средств
Год издания: 2018
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2018.-N 2.-С.57-61. Библ. 10 назв.
Просмотров: 57