Влияние антиоксиданта на основе янтарной кислоты на превращение метгемоглобина в оксигемоглобин in vitro

Аннотация:

Цель исследования — показать возможность использования антиоксиданта на основе янтарной кислоты для восстановления метгемоглобина до оксигемоглобина в крови in vitro. Материалы и методы. Забор крови в микроветты, содержащие ЭДТА, производили у пяти здоровых доноров при профилактических осмотрах. В кровь in vitro добавляли раствор NaN02 для получения метгемоглобина (MetHb). В качестве антиоксиданта использовали комплексный препарат, состоящий из следующих активных компонентов: янтарная кислота, инозин, рибофлавин и никотинамид. Измеряли спектр поглощения суспензий эритроцитов с различным содержанием препарата Dl(ламбдаl)exper с шагом 1 нм. Методом нелинейной регрессии рассчитывали концентрации производных гемоглобина в суспензиях. Результаты. В экспериментах, когда метгемоглобин взаимодействовал с препаратом, оптическая плотность пиков, характерных для оксигемоглобина, увеличивалась, а спектральный пик метгемоглобина снижался. Чем больше были концентрация препарата и время инкубации, тем эффективнее был процесс восстановления метгемоглобина до оксигемоглобина. Заключение. Экспериментально доказали, что при начальной концентрации метгемоглобина в крови 91—93% добавление препарата снижает его концентрацию до 25—27%. В то же время, благодаря автовосстановлению, концентрация метгемоглобина уменьшается только до 84%. Показанный эффект может иметь практическое применение при критических состояниях, при хранении донорской крови, при проведении гемотрансфузни, при воздействии физико-химических факторов на кровь. Ключевые слова: эритроциты; метгемоглобин; оксигемоглобин: восстановление; янтарная кислота; инозин; рибофлавин; никотинамид; цитофлавин. Введение: Эндогенная и экзогенная интоксикация различной природы может вызывать образование активных форм кислорода (АФК) в крови и модифицировать молекулы гемоглобина в эритроцитах. При этом происходят процессы окисления железа Fe2+->Fe3+ и превращения молекулы гемоглобина (Hb) и оксигемоглобина (Нb02) в метгемоглобин (MetHb). В нормальном состоянии организм поддерживает биохимическое равновесие, и метгемоглобин в крови человека всегда присутствует в небольших количествах (0,5—1,5%). Нарушение равновесия между содержанием образующихся АФК и антиоксидантными защитными механизмами клетки может произойти под влиянием различных эндогенных и экзогенных факторов (бактерии, вирусы, химические агенты, ряд фармпрепаратов, загрязнение окружающей среды, ионизирующие излучения, травмы, массивные кровотечения и др.). Кроме того, метгемоглобинемия может быть вызвана передозировкой некоторых лекарственных средств (лидокаин, новокаин, противомалярийные препараты и др.), отравлением химическими веществами (анилиновыми красителями, нитратами, хлорбензолом). При усилении окислительных процессов собственная антиоксидантная система уже не может «справляться» с увеличенным количеством активных форм кислорода и азота и образованием MetHb. Увеличение содержания метгемоглобина выше физиологического уровня приводит к нарушению газообмена. При удельной концентрации MetHb более 30% в жизненно важных органах могут развиваться необратимые изменения. Известно, что для лечения метгемоглобинемии применяется метиленовый синий. Однако он не всегда эффективен и обладает рядом побочных токсических эффектов. Поэтому поиск лекарственных препаратов, способных усилить эффективность антиоксидантной системы эритроцитов и предотвратить образование АФК и MetHb, является актуальным. Особенный интерес представляют вещества, содержащие природные компоненты. Примером таких препаратов является цитофлавин (ООО «НТФФ «ПОЛИСАН», Российская Федерация). Его фармакологические эффекты определяются совместным действием, составляющих его ингредиентов: янтарная кислота, инозин, никотинамид, мононуклеотид рибофлавина натрия. Цитофлавин может стимулировать образование энергии; уменьшать образование АФК; активировать метаболические процессы после ишемии и реоксигенации. Цель работы - показать возможность использования антиоксиданта на основе янтарной кислоты для восстановления метгемоглобина до оксигемоглобина в крови in vitro. Материал и методы: Кровь (150 мкл) брали в микроветты с ЭДТА (Sarstedt AG and Co., Germany) у пяти доноров во время профилактических скринингов. Исследование проводили в соответствии с принципами Хельсинкской декларации и было одобрено этическим комитетом Федерального научно-клинического центра реаниматологии и реабилитации НИИ общей реаниматологии им. В.А. Неговского. Согласие было получено от каждого участника до начала исследования. Параметры гематологии измеряли с помощью гематологического анализатора Advia 60-СТ (Bayer, Germany). В исходной крови гематокрит составлял 39—45%, концентрация гемоглобина составляла 110—146 г/л. Для окисления гемоглобина в крови от intra использовали раствор нитрита натрия NaN02. Для приготовления базового раствора нитрита натрия (раствор I) 1.4 г NaN02 (Sigma- Aldrich Co. LLC) разбавляли в 10 мл фосфатного буфера (PBS), рН-7.4 (MP Biomedicals, USA). Раствор S получали разбавлением раствора I в 10 раз. Цитофлавин -комплексное лекарственное средство, содержащее активные вещества - янтарная кислота - 100 г, никотинамид - 10 г, рибоксин (инозин) - 20 г, рибофлавина фосфат натрия (рибофлавин) - 2 г; вспомогательные вещества: меглюмин - 165 г, натрия гидроксид - 34 г, вода д ля инъекций - до 1 литра. Оптическая плотность растворов измерялась с помощью цифрового спектрофотометра Unico 2800 (USA). Измеряли спектр поглощения Di(A/)exp суспензии эритроцитов в буфере PBS (рН 7,4) в диапазоне длин волн 500-700 нм с шагом 0,5-1 нм. Здесь А: - длины волн света, на которых измеряли оптическую плотность, I -номер длины волны. Для нахождения концентраций производных гемоглобина использовали метод Nonlinear Fitting. Эмпирический спектр Dl(дельтаl)exp аппроксимировали теоретической кривой Dl(дельтаl)theor, которая наилучшим способом вписывается в экспериментальную кривую. При аппроксимации учитывали поглощение света разными производными гемоглобина. Одновременно учитывались эффекты рэлеевского рассеяния света как на структурах размером D<ламбда (коэффициент S), так и на частицах размером D>ламбда (коэффициент К): Dl(лямбдаl)theor =Еnheh,l (лямбдаl)СhL+K+S/лямбда 4l, (1) Здесь индекс h обозначает производные гемоглобина: HbO2(оксигенированный Hb), Hb (дезоксигенированный Hb), MetHb (метгемоглобин), HbNO (нитрозил железа Hb), MetHbN02 (связанный нитритом MetHb), MetHbNO (трехвалентный нитрозил Hb). L - это толщина слоя раствора. Для расчета концентрации производных гемоглобина был использован метод аппроксимации кривой в программе Origin (OriginLab, Northampton, MA). С помощью Function Builder мы создаем функцию Dl(ламбдаl)theor (уравнение (1)). При этом статус зависимой переменной был присвоен Dl(ламбдаl)exp. Индивидуальная поглощательная способность при различных длинах волн эпсилонlh(ламбдаl) являлись независимыми переменными. Независимые концентрации Сhbо2, Сhb, Сmethb, Сhbno, Сmethbno2, Сmethbno, а также коэффициенты рассеяния К и S рассматривались модельными параметрами. Эти параметры модели подбираются так, чтобы теоретическая кривая Dl(ламбдаi)theor описывала экспериментальные данные Dl(ламбдаI)exp лучшим способом. При аппроксимации должно выполняться условие, что Сi>0. Эксперименты in vitro провели по схеме, представленной на рис. 1. Микроветты со свежей цельной кровью 150 мкл были приготовлены (стадия 1). К каждой микроветте с цельной кровью добавляли 10 мкл растворов NaN02 с концентрацией С=0,14 г / мл (стадия 2). Поэтому в микроветте концентрация NaN02 составляла 100 мМ. Суспензию с этой концентрацией назвали NaNO2 (L). Также исследовали эффекты NaNO2 с концентрацией 10 мМ NaN02 (S). В течение 10 мин инкубации образовался MetHb, и кровь становилась коричневой. Раствор NaN02 не добавляли к контрольным микроветтам (контроль). На 3 стадии отмывали суспензии от NaN02. Для этого суспензии с эритроцитами из каждой микроветты переливали в свою соответствующую пробирку эппендорф с 1 мл PBS. Суспензии в пробирках эппендорф центрифугировали (1500 мин-1, 5 мин), затем удаляли надосадочную жидкость и добавляли снова по 1 мл буфера в каждый эппендорф и снова центрифугировали. Таким образом, концентрация NaN02 существенно уменьшилась после третьей промывки и была близка к 0. После третьей промывки полный объем суспензии эритроцитов в каждом эппендорфе составлял 150 мкл, что равно исходному объему крови. Далее в каждый эппендорф добавляли соответствующее количество цитофлавина (стадия 4). Перед добавлением цитофлавина в количестве CYTi (мкл) удаляли такое же количество буфера СУТ; (мкл) из эппендорфа. Индекса i в записи CYTi указывает объем цитофлавина (в мкл) в данном эппендорфе. Приготовление суспензий эритроцитов с цитофлавином провели согласно схеме 2—5 и таблице. Суммарный объем суспензии сохраняли всегда равным 150 мкл. (L/S) обозначает раствор NaN02 с концентрацией L или S. Контрольные суспензии (в них не был добавлен раствор NaN02, но был добавлен цитофлавин) выполняли согласно выражению: 75RBC+(75-CYTi)PBS+CYTi (мюl) (2) Такие суспензии обозначены как RBC СУТi(3) Исследуемые суспензии (в них был добавлен раствор NaN02 и после промывки добавлен цитофлавин) выполняли следующим образом: 75 RBC NaN02(L/S)+(75-CYTi) PBS+CYT,(мюl) (4) Такие суспензии обозначены как RBCNaN02(L/S) CYTi(5) В опытах величины CYTt составили: CYTo=0 мюl CYT, CYT25= 2,5мюl CYT, CYT5 = 5 мюl CYT, CYTi0= 10 мюl CYT. В данном случае CYT, - это объем цитофлавина в 150 мкл суспензии (не концентрации). Для расчета объемной концентрации цитофлавина в каждом эппендорфе можно воспользоваться формулой: ОТ,/150 (мкл/мл). Гематокрит в эппендорфе почти совпадает с отправной точкой для каждой серии экспериментов с точностью до 10%. Суспензии эритроцитов инкубировали СУТl течение от 1 часа до 24 часов, затем измеряли спектры поглощения (стадия 5). Для измерения спектров поглощения Vsusp = 20 мкл суспензии из эппендорфа добавляли к кварцевой кювете с 2,4 мл PBS и измеряли оптическую плотность. Этот процесс повторяли для суспензии каждого эппендорфа. Эксперименты с кровью каждого донора проводили по три раза. Для каждого эппендорфа спектр измеряли 3 раза. Так провели 45 серий экспериментов по схеме (рис. 1). В каждой серии измеряли спектры контрольных растворов, а также растворов с разным количеством цитофлавина. Спектры, показанные на рис. 2, типичны для данных концентраций NaN02 и CYTi для крови разных доноров. Статистический анализ экспериментальных данных провели с использованием программы Origin (OriginLab, Northampton, MA). Для определения неизвестных концентраций производных гемоглобина аппроксимирующую кривую построили по схеме Analysis - Fitting - Nonlinear Curve Fit - the Function (1). В результате аппроксимации, получили параметр R-Square, который являлся количественным представлением уровня аппроксимации. Параметр R-Square должен быть больше 0,98. Данные представили как среднее ± стандартное отклонение. Использовали программу One-Way AN OVA для определения статистической значимости влияния цитофлавина (в разных концентрациях) на снижение MetHb по сравнению с автовосстановлением (RBCNaNO2(L/S)CYT0). Значимые различия отмечали при р<0,05. Результаты и обсуждение: Цитофлавин, введенный в суспензию эритроцитов, способствовал восстановлению метгемоглобина до оксигемоглобина. После добавления NaN02 почти весь гемоглобин превращался в метгемоглобин, для которого характерны определенные пики в спектре поглощения. Особенно выделялся пик на длине волны А=630 нм. После промыва эритроцитов по-прежнему преобладал MetHb (около 93%). Добавление разного количества цитофлавина CYTi привело к изменению спектра поглощения, и при этом наблюдали концентрационную зависимость. На рис. 2 для NaN02 (L) и для NaN02 (S) привели спектры поглощения суспензий эритроцитов для контрольной RBCCYT0 и RBCNaN02(L/S)CYT, для различных концентраций цитофлавина -CYT0,CYT2J,CYT- и CYT10 после инкубации в течение t1=1 часа и t24=24 часов. Для суспензии L после 1 часа инкубации с цитофлавином наблюдали спектры, характерные для MetHb для всех образцов (рис. 2, а,). Можно сделать вывод, что СУТ0,2.5,5,10 практически не повлияли на снижение MetHb. После 24 часов инкубации для образца RBCNaNO2(L)CYT0, в который не добавляли цитофлавин, наблюдали спектр, характерный для MetHb (рис. 2, b1 коричневая кривая). Произошел процесс автовосстановления. Но он был незначительным - не более 2—10%. При концентрации цитофлавина RBCNa-N02(L)CYT25 стали проявляться пики на длинах волн Д=542 нм и n=577 нм, характерные для Нb02 (рис. 2, b1 и зеленая кривая). Однако восстановление MetHb до Нb02 и Нb было не полным. За это время инкубации восстановилось только 59% метгемоглобина. Повышение концентрации цитофлавина до CYT10 существенно усилило эффект восстановления метгемоглобина в образцах RBCNaN02(L)CYT5 (рис. 2, b1: голубая кривая) и RBCNaNO2(L)CYT10 (рис. 2, b1 синяя линия). Пики, характерные для оксигемоглобина, почти достигли контрольных значений, наблюдаемых в образце RBCCYT0 без воздействия NaN02 (рис. 2, b1 красная кривая). В этом случае уже восстановилось около 25—27% метгемоглобина. Для суспензий S после 1 часа инкубации во всех образцах наблюдали спектральные характеристики для комбинации различных производных гемоглобина (рис. 2, а2). Для всех концентраций СУТ0,2.5,5,10 спектры были приблизительно одинаковыми с небольшим, но очевидным пиком при ламбда=630 нм. Это соответствует 30—40% MetHb в суспензиях. После 24 часов инкубации для образца RBCNaNO2(S)CYT0, в который цитофлавин не добавлялся, этот пик остался неизменным (рис. 2, b2, коричневая кривая). Пики при ламбда= 542 нм и ламбда= 577 нм, характерные для Нb02, начали увеличиваться для всех образцов с цитофлавином. Для RBCNaN02(L)CYT5 (рис. 3, b2, голубая кривая) и RBCNaNO2(L)CYT10 (рис. 3, b2, синяя кривая) пики, типичные для метгемоглобина, практически исчезли. В этом случае концентрация MetHb снизилась до 10—12%, но наблюдали небольшой пик для RBCNaN02(L)CYT2 5 (рис. 2, b2, зеленая кривая). Это соответствовало 16—18% MetHb. Визуальный эффект влияния цитофлавина на восстановление MetHb до Нb02 показан на рис. 3. На фотографиях представлены суспензии L красных клеток крови в PBS, время инкубации эритроцитов с CYT10 (или с PBS) составляло t1=1 ч (рис. 3, а) и t24=24 ч (рис. 3, b). В течение t1=1 часа инкубация цитофлавина с суспензией эритроцитов не влияла на концентрацию MetHb (рис. 4, а). Суспензия для образца RBCNaNO2(L)CYT10 была по-прежнему коричневой также, как и для образца RBCNaN02(L)CYT0 без цитофлавина. Однако после инкубации в течение t24=2A часов суспензия с цитофлавином RBCNaNO2(L)CYT10 покраснела (рис. 3, b), что наглядно показывает, что в суспензии произошел процесс восстановления метгемоглобина до оксигемоглобина. В то же время суспензия RBCNaNO2(L)CYT0 без цитофлавина осталась коричневой - процесс самовосстановления почти отсутствовал. Контрольная суспензия RBCC0 без добавления NaN02 и цитофлавина была красной как исходно, так и через 24 часа. Эти фотографии качественно иллюстрируют эффект изменения концентраций производных гемоглобина. Они соответствуют количественным результатам экспериментов и расчетов. Во время реакций возможно образование следующих производных гемоглобина Hb02, Нb, MetHb, HbNO, MetHbNO2, MetHbNO. Был использован метод аппроксимации кривой. Экспериментальные зависимости Dl(Al)exp и аппроксимированные кривые Dl(Al)teor представлены на рис. 4: Dl(Al)teor=EHbilO2,l Снbо2 L+Eнb,l Снb L+EMetHb,l СMetHb L+EHbNO,l С HbNO L + EMetHbNO-2,l С.MetHbNO,l +EMetHbN0,I С MetHbNO L + K+S/ламбда4l (6) Концентрации шести производных гемоглобина были определены аппроксимацией экспериментально измеренных спектров теоретическими кривыми. На рис. 4, а и рис. 4, b показана аппроксимация экспериментальных спектров теоретическими кривыми для расчетных концентраций производных гемоглобина. Через каждые 3 часа в течение 24 часов инкубации в экспериментах изучали кинетику восстановления производных гемоглобина в присутствии цитофлавина (рис. 5) для суспензии L. На рис. 5, а представлены зависимости изменения концентраций производных гемоглобина с Fe3+ — MetHb+MetHbN02+MetHbN0. На рис. 5, b представлены зависимости изменения концентраций производных гемоглобина с Fe2+ — Hb02+Hb+HbN0. Цитофлавин увеличивал концентрацию производных гемоглобина с Fe2+ и, соответственно, уменьшал концентрацию с Fe2+. Важно, что действие цитофлавина постепенно развивалось со временем. Это может быть продемонстрировано кинетикой уровня значимости. Данные д ля каждой точки времени инкубации при определенной концентрации цитофлавина CYT2.5, CYT5, CYT10 сравнивали с соответствующими данными CYT0 (автовосстановление). В моменты времени t1=1 час и t3=3 часа не было существенных различий в эффекте препарата при всех концентрациях цитофлавина. В момент времени t6=6 часов не было выявлено никаких существенных различий для суспензии с CYT25, но для CYT5 и CYT10 появились существенные различия при * — р<0,05. И к t9=9 часам уровень значимости стал *** — р<0,001 для СУТ5 и CYTI0. Также был увеличен эффект при использовании концентрации препарата СУТ25, ** — p<0,01. На рис. 2 представлены гистограммы процента MetHb в суспензиях серии L (рис. 2, с,) и S (рис. 2, с2) в зависимости от разных концентраций NaN02 и соответствующего различного начального содержания метгемоглобина. При t1=1 час не было существенных различий между содержанием MetHb для всех концентраций цитофлавина — СУТ2.5, СУТ5 и CYT10 относительно CYT0 (рис. 2). Но посте t24=24 часа для обеих серий наблюдали существенные различия между данными для образцов с цитофлавином по сравнению с суспензиями без него. Более того, уровень значимости не был одинаковым для разных концентраций цитофлавина. Поэтому для CYT25 * — р<0,05 (для S) и ** — p<0,01 (для L). В то же время для СУТ5 и CYT10 ** — p<0,01 (для S) и *** -р<0,001 (для L). Не было статистических различий между средними значениями MetHb (%) из-за автовосстановления в образцах через 24 часа и 1 час, р<0,4. В отдельном эксперименте было показано, что метгемоглобин с помощью цитофлавина превращается именно в оксигемоглобин, а не в карбоксигемоглобин. Для доказательства применили стандартную методику, основанную на использовании дитионита натрия. После добавления дитионита характерные для оксигемоглобина параметры спектра исчезали, а спектр имел только один максимум, характерный для дезоксигемоглобина при ламбда=554 нм. Высокое содержание MetHb в крови может возникать при отравлении анилином и его производными, некоторыми местными анестетиками, нитритами и нитратами. В связи с развитием фармацевтической и химической промышленности метгемоглобинемия экзогенной обусловленности встречается очень часто. В наших опытах гемоглобин превращался в метгемоглобин при действии NaN02 на суспензию эритроцитов: при этом Fe2+ переходит в Fe3+. В таких условиях возможно образование производных гемоглобина с железом Fe3+: MetHb+MetHbN02+MetHb-NO. Также в растворе могут содержаться и производные с Fe2+: Hb02+Hb+HbN0. Из этих 6 компонентов только Нb02 переносит кислород и только Нb потенциально способен присоединить кислород. Нарушение окислительных процессов в крови ведет к гипоксии тканей, изменению форм и наноструктуры мембран красных клеток крови. Характер взаимодействия производных гемоглобина пока недостаточно ясен. Например, возможные реакции восстановления Fe3+ в Fe2+ были показаны в работе. Изменение форм гемоглобина было исследовано не только in vitro, но также in vivo. Реакции превращения Fe3+->Fe2+ и Fe2+—>Fe3+ так или иначе связаны с окислительно-восстановительными процессами в эритроцитах. Поэтому добавление в суспензию эритроцитов химфармпрепаратов, способных влиять на окислительно-восстановительные процессы, может также влиять и на процессы взаимодействия производных гемоглобина. В результате соотношение их концентраций может существенно измениться. Ранее нами было показано, что восстановлению метгемоглобина до оксигемоглобина способствуют перфторуглеродные соединения. Положительное действие цитофлавина на организм человека при кардиохирургических операциях, в постоперационный период, при последствиях инфаркта мозга известно с 2004 года. Цитофлавин имеет цитопротекторный эффект. Он является метаболическим регулятором. Этот препарат оказывает антиоксидантное и антигипоксическое действие, положительное влияние на выработку энергии в клетке, уменьшает образование свободных радикалов и восстанавливает активность антиоксидантных ферментов. Цитофлавин обладает антиншемическим действием, улучшает коронарный и церебральный кровоток, ограничивает зону некроза. В работе приведены клинические результаты антиокислительного действия цитофлавина на организм человека. Представляет научный интерес показать действие цитофлавина на гемоглобин в прямом биофизическом эксперименте in vitro. Это может позволить в дальнейшем раскрыть механизмы антиокислительного действия этого препарата. Фармакологические эффекты цитофлавина регулируются совместным действием составляющих его ингредиентов. Этот комплексный препарат состоит из двух метаболитов (янтарной кислоты и инозина) и двух коферментов (мононуклеотида рибофлавина и никотинамида). Широко известно фармакологическое действие каждого компонента по отдельности. Каждая компонента способна внести вклад в окислительно-восстановительные процессы, происходящие в суспензии красных клеток крови. Янтарная кислота является ключевой биохимической молекулой. Природа использует ее для энергетического метаболизма в растениях, тканях человека и животных. Янтарная кислота является промежуточным продуктом цикла Кребса. Исследования показали, что роль янтарной кислоты выходит далеко за пределы энергетических процессов . Также известно антигапоксическое и антиоксидантное действие янтарной кислоты. Инозин используют в растворах с целью повышения качества компонент донорской крови при длительном хранении. Никотинамид, предназначенный для стабилизации мембраны эритроцитов и текучести крови, включен в состав для криоконсервации. Мононуклеотид рибофлавина натрия (FMN-Na, мононуклеотид флавина) играет важную роль в окислительно-восстановительных реакциях. Рибофлавин - это водорастворимый витамин, также известен как витамин В2. В организме рибофлавин встречается прежде всего как неотъемлемый компонент ко-ферментов, одним из которых является мононуклеотид рибофлавина натрия. Существует значительное нарушение соотношения между плазменным мононуклеотидом рибофлавина натрия и рибофлавином у пациентов в критических состояниях. Флавины действуют как кофактор во многих ферментах, которые катализируют самые разнообразные биологические реакции и содержат один из самых универсальных окислительно-восстановительных центров in vivo. Использование органических окислительно-восстановительных активных веществ, растворенных в электролитах, приобретает все больший интерес для создания стабильной биомиметической системы аккумулирования энергии - окислительно-восстановительных батарей. Таким образом все 4 компонента цитофлавина могут внести вклад в окислительно-восстановительные процессы, происходящие с производными гемоглобина. Возможно, их комбинированное действие и привело к явлению восстановления метгемоглобина до оксигемоглобина в присутствии цитофлавина. При этом возможно два пути влияния цитофлавина на процессы превращений железа Fe3+—>Fe2+. Непосредственное химическое участие молекул компонент цитофлавина в цепочках окислительно-восстановительных процессов. Это влияние может быть аналогично действию метиленового синего или аскорбиновой кислоты, используемых при лечении метгемоглобинемии. Связывание компонентов цитофлавина с активными окислительными центрами обеспечивает участие в ингибировании процессов окисления. Для расчетов концентраций производных гемоглобина использован метод Nonlinear Fitting для обработки экспериментальных спектров. Получено хорошее согласование теоретических данных с экспериментальными с коэффициентом R-Square > 0,99. Теоретические данные согласованы не только в описании спектра, но и в оценке остаточного уровня К. В нашей работе впервые показано антиокислительное свойство цитофлавина в прямом биофизическом эксперименте in vitro. Кровь от здоровых доноров использовали для того, чтобы изначально иметь нормальную концентрацию оксигемоглобина и метгемоглобина. Использование цитофлавина в данном модельном эксперименте привело к восстановлению метгемоглобин до оксигемоглобина. При этом восстанавливающий эффект цитофлавина происходит только, если метгемоглобин находится внутри клетки. Воздействие NaNO2 на свободный гемоглобин в дистиллированной воде приводило к возникновению метгемоглобина. Однако добавление цитофлавина в этом случае не приводило к восстановлению метгемоглобина до оксигемоглобина. Это интересное явление будет детально изучено в будущих экспериментах. Проделанные нами эксперименты могут стать основой для исследования возможности использования цитофлавина для восстановительных процессов в крови пациентов с острыми отравлениями, также планируется изучить действие отдельных компонент на этот процесс. Заключение: Показанный эффект может иметь как фундаментальное, так и практическое применение. Цитофлавин может быть использован непосредственно при лечении метгемоглобинемии в клинике. Также важно будет использовать его во время хранения донорской крови, при проведении гемотрансфузии и при разработке кровезаменителей. Весьма перспективным также является изучение молекулярных механизмов протекторного действия цитофлавина при широком спектре экзогенных отравлений.

Авторы:

Издание: Общая реаниматология
Год издания: 2018
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2018.-N 2.-С.46-59. Библ. 29 назв.
Просмотров: 310