ВЛИЯНИЕ АУТОТРАНСПЛАНТАЦИИ КОСТНОГО МОЗГА НА НЕЙРОТРАНСМИТТЕРНЫЕ СТРУКТУРЫ APPENDIX VERMIFORMIS У СТАРЫХ КРЫС

Аннотация:

Изучено влияние аутотрансплантации костного мозга на нейротрансмиттерные структуры appendix vermiformis. Исследование показало, что у старых крыс через 40 мин после аутопересадки костного мозга увеличивалось число нейротранс-миттерных структур (тучные и гранулярные люминесцирующие клетки) с высоким содержанием в них катехоламинов и серотонина. В центре размножения лимфоидных узелков appendix vermiformis определяли клеточные диффероны с повышенным содержанием нейроаминов. Через 2 ч после аутопересадки костного мозга число их уменьшалось, содержание катехоламинов и серотонина также снижалось. При иммуногистохимической реакции отмечено увеличение пролиферативной активности клеток как в собственной пластинке t. mucosa крипт, так и в лимфоидных узелках appendix vermiformis до 40 мин эксперимента. Через 2 ч Кi-67 позитивные клетки уменьшались как в t. mucosa, так ив(. s/mucosa appendix vermiformis. Ключевые слова: трансплантация, appendix vermiformis, гранулярные люминесцирующие клетки, тучные клетки, катехоламины, серотонин Неопластическая пролиферация кроветворных клеток у лиц пожилого и старческого возраста составляет около 55 % и занимает первое место в структуре летальности. Из литературных данных известно, что большинство гематологических заболеваний связано с нарушением обмена биогенных аминов в клетке, приводящих к возникновению патологических сдвигов в функционировании красного костного мозга. Биогенные амины (катехоламины, серотонин) синтезируются в тучных и гранулярных люминесцирующих клетках, они способны выполнять роль трансмиттеров. Данные структуры паракринным и дистантным воздействием оказывают влияние на пролиферацию, дифференцировку молодых клеток и функциональную активность зрелых, обладают широким спектром биологических эффектов, оказывают регулирующее действие на клетки и ткани . Особенно актуальным и значимым представляется изучение нейротрансмиттерных структур у пожилых и лиц старческого возраста при аутотрансплантации костного мозга ввиду того, что при неопластической пролиферации в лечении применяют цитотоксические препараты для уничтожения лейкозных клеток. Остаточная регенеративная способность уцелевших нормальных стволовых клеток костного мозга и лимфоидной ткани в них окажется недостаточной. В связи с этим необходимо искать органы с продуцентами биогенных аминов и их содержащих в своем собственном организме. Таким органом может оказаться appendix vermiformis, поскольку он является периферическим органом кроветворения и иммунитета, и воздействие на него цитотоксических веществ осуществляется в последнюю очередь. В связи с этим необходимо исследовать appendix vermiformis, так как, по данным литературы , он реагирует на введенные вещества в последнюю очередь. Цель исследования — изучение влияния аутотрансплантации костного мозга на нейротрансмиттерные структуры appendix vermiformis. Материалы и методы Эксперименты проводили на половозрелых крысах-самцах 24-месячного возраста (старых) линии Wistar. Процедуры по уходу за крысами осуществляли согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ МЗ РФ ОТ 19.06.2003 Г. № 267) и в соответствии с «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях». Для этого животные в одно и то же время суток получали пищу, их содержали в стандартных условиях вивария, все манипуляции (выделение клеток костного мозга) осуществляли в одно и то же время суток до приема пищи. За 12 ч до выделения клеток костного мозга животные не получали пищу. Клетки костного мозга извлекали всегда с 8 до 10 ч утра по местному времени, подсчет и гистологические исследования — с 9 до 12 ч по местному времени. У животных извлекали костный мозг путем аспирации 0,1 мл из бедренной кости и смешивали в 1 мл 0,85 % физиологического раствора NaCl, полученную суспензию костного мозга вводили в хвостовую вену этой же крысы . Число клеток в полученной суспензии костного мозга подсчитывали с помощью проточного спектрофотометра «Ф-2000». В 1 мл суспензии число клеток в прег делах 1,6'107-2,М08. В качестве контрольных использовали крыс без введения. Животных выводили из эксперимента через 40 мин и 2 ч после аутотрансплантации костного мозга путем декапи-тации. Для изучения моноаминосодержащих структур использовали люминесцентно-гистохими-ческий метод Фалька—Хилларпа (1962). Подсчет гранулярных и тучных клеток производили в пяти полях зрения микроскопа «Люмам-6» (ЛОМО, Россия) при ув. 40, ок. 10, диаметр зонда 0,5 мм. Полученные результаты обрабатывали с помощью программы Microsoft Office Excel с оценкой статистической значимости различий средних величин с помощью Т-критерия Стьюдента или критерия Манна—Уитни. Оценку различий качественных признаков проводили с использованием z-критерия. Различия между данными контрольных и опытных вариантов считали достоверными прир<0,05. Для оценки пролиферативной активности клеток применяли антитела к маркеру Ki-67. Ядра клеток, содержащих Ki-67, окрашивались в коричневый цвет разной степени интенсивности. Иммуногистохимический метод осуществляли моноклональными антителами к маркеру Ki-67, клон ММ-1 (NovoCastra, Великобритания), на базе патологоанатомического отделения Республиканского клинического онкологического диспансера Чувашской Республики. Срезы appendix vermiformis толщиной-3 мкм, обработанные Lpolysine, подвергали сушке при комнатной температуре в течение суток. Окрашивание осуществляли с использованием иммуногистохимических автоконтейнеров «Auto-stamer- 360» (THERMO, Великобритания) и «Leica BOND—МАХ» (Германия). После фиксации в формалине и заключения в парафин материала в течение 20 мин гистологические срезы выдерживали на водяной бане в 0,01 М цитратном буферном растворе (рН 6) при 95 °С. Инкубацию с первичными антителами Ki-Ы проводили при комнатной температуре в течение часа. Для визуализации продуктов иммунной реакции использовали стрептавидин-биотиновый перокси-дазный метод («Dako», LSAB+Kit,HRP), в качестве красящего соединения был применен раствор диаминобензидина («Dako», Liguid DAB+), ядра докрашивали гематоксилином. На базе микроскопа «Leica DM4000B» с использованием цветной фотокамеры «Leica DFC 425» и лицензионной программы Leica Application Sute 3.6.0 получали цифровые снимки микропрепаратов. Фотографии для программных морфометрических измерений были получены при ув. 400, 900. Для количественных замеров интенсивности ядерной иммуно-гистохимической реакции выполнен подсчет числа окрашенных ядер к числу неокрашенных и перевод значений в проценты (http://imtmicroscope.fi/ immunoratio/). Результаты и обсуждение. Основные морфологические данные по методу Фалька—Хилларпа. Через 40 мин после введения суспензии собственного костного мозга крысам, в собственной пластинке t. mucosa крипт appendix vermiformis определяли увеличение количества тучных клеток на 125+7%, содержание катехоламинов и серото-нина в этих клетках возросло на 148+3 и 160±2 % соответственно. Аналогичные изменения наблюдали в гранулярных люминесцирующих клетках, где количество этих клеток повысилось на 108+4 % (табл. 1), содержание катехоламинов и серотонина в них возросло на 101+1 и 105±4 % соответственно. В лимфоидных узелках t. s/mucosa произошло увеличение количества тучных клеток на 110±8% и гранулярных люминесцирующих клеток на 116+9 % по сравнению с интактными крысами. Содержание катехоламинов и серотонина в тучных клетках составило 101±2 и 116+8%, в гранулярных люминесцирующих клетках — 120+4 и 116±4% соответственно. В межфолликулярной лимфоидной ткани число гранулярных люминесцирующих клеток также повысилось незначительно, содержание катехоламинов и серотонина в этих клетках изменилось незначительно.В центре размножения лимфоидных узелков appendix vermiformis визуализировались клеточные диффероны, в состав которых входили гранулярная люминесцирующая, ретикулярная клетка, макрофаг. В этих структурах, по сравнению с интактными крысами, отмечено повышенное содержание катехоламинов и серотонина на 108+8%. Количество таких клеточных комплексов увеличилось на 106+7 % по сравнению с интакными крысами и составило 32,6+0,3 у. е., у интактных — 15,3±0,2 у. е. {табл.2). Через 2 ч после введения суспензии костного мозга крысам, в собственной пластинке t. mucosa крипт appendix vermiformis выявлено снижение числа тучных клеток по сравнению с интактными животными, содержание катехоламинов и серотонина в этих клетках также уменьшилось. В гранулярных люминесцирующих клетках отмечено дальнейшее уменьшение их числа, содержание катехоламинов и серотонина в них также снизилось. Сходные изменения наблюдали в лимфоидных узелках t. s/mucosa, где число тучных и гранулярных клеток уменьшилось, содержание катехоламинов и серотонина в них достигало минимальных значений по сравнению с интактными крысами. Через 2 ч после введения суспензии костного мозга клеточные диффероны распадаются, в центре размножения лимфоидных узелков определяли единичные люминесцирующие структуры. Содержание в них катехоламинов и серотонина достигало минимальных значений. Иммуногистохимическая реакция с антителами к маркеру клеточной пролиферации Ki-67 неоднозначна для t. mucosa и t. s/mucosa appendix vermiformis у интактных крыс и после аутопересадки костного мозга. Морфологически клетки, позитивно экспрессируемые белок Ki-67, характеризуются округлой и овальной формой с разной степенью окраски ядер. Через 40 мин после введения суспензии костного мозга у опытных крыс по сравнению с интактной группой наблюдали увеличение числа про-лиферирующих клеток в собственной пластинке /. mucosa крипт в 1,3 раза (р<0,05) и Т. s/mucosa лимфоидных узелков — в 1,4 раза (р<0,05). Через 2 ч после аутопересадки костного мозга количество экспрессирующих Ki-67 клеток заметно уменьшилось в обеих структурно-функциональных зонах, причем в большей степени — в Т. s/mucosa лимфоидных узелков (табл. 3). Заключение Исследование показало, что у старых крыс через 40 мин после аутопересадки костного мозга происходит увеличение числа нейротрансмиттер-ных структур (тучных и гранулярных люминесцирующих клеток) с высоким содержанием в них катехоламинов и серотонина. В центре размножения лимфоидных узелков appendix vermiformis визуализируются клеточные диффероны с повышенным содержанием нейроаминов. Через 2 ч после введения суспензии костного мозга число их уменьшается, содержание катехоламинов и серотонина также снижается. При иммуногистохимической реакции отмечен высокий уровень пролифе-ративной активности в клетках как в собственной пластинке Т. mucosa крипт, так и в лимфоидных узелках appendix vermiformis до 40 мин эксперимента, что, возможно, влияет на процессы пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов. Однако через 2 ч Ki-67 позитивные клетки уменьшаются как в Т. mucosa, так и в Т s/mucosa appendix vermiformis. Таким образом, можно заключить, что после аутотрансплантации костного мозга у старых крыс материал из appendix vermiformis нужно извлекать до 2 ч после пересадки костного мозга, а затем вводить эти нейротрансмиттерные структуры в организм отдельно или со стволовыми клетками. Поскольку через 2 ч снижалось число этих структур, биогенных аминов, отмечался распад клеточных дифферонов.

Авторы:

Издание: Успехи геронтологии
Год издания: 2018
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2018.-N 1.-С.91-94. Библ. 8 назв.
Просмотров: 27