МОДИФИКАЦИЯ МИЕЛОТОКСИЧЕСКОГО И ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ДЕЙСТВИЯ ПОЛИХИМИОТЕРАПИИ С ПОМОЩЬЮ ПОЛИСАХАРИДОВ TUSSILAGO FARFARA L.

Аннотация:

В эксперименте на мышах линии С57В1/6 с карциномой легких Льюис показана возможность снижения нейтропении, вызванной применением противоопухолевых препаратов по схеме "цисплатин+паклитаксел", и повышение эффективности лечения с помощью полисахаридов Tussilagofarfara L. Стимулирующее действие полисахаридов на гранулоцитарный росток кроветворения сравнимо с таковым препарата рекомбинантного колониестимулирующего фактора нейпогена. Входящие в состав комбинированной противоопухолевой терапии цитостатики не обладают специфичностью и помимо опухолевых клеток повреждают здоровые, быстро пролиферирующие ткани, в первую очередь костный мозг. Схемы и режимы полихимиотерапии с включением препаратов группы таксанов и препаратов платины являются высокоэффективными и применяются для лечения опухолей различных локализаций. Для препаратов этих фармакологических групп лимитирующей является гематологическая токсичность, при этом нейтропения — наиболее серьезное ее проявление. В клинической практике для коррекции повреждающего действия цитостатиков на гранулоцитарный росток кроветворения наиболее часто используется рекомбинантный КСФ — нейпоген. В ранее проведенных исследованиях показано, что при использовании полисахаридов Tussilago farfara L. (мать-и-мачехи обыкновенной) в условиях монохимиотерапии снижается гематологическая токсичность и повышается противоопухолевое и антиметастатическое действие цитостатиков различного механизма действия. Поскольку в клинической практике, как правило, применяется одновременно два и более антибластомных средства, адекватной экспериментальной моделью для изучения возможности снижения токсичности цитостатиков является использование комбинации цисплатина и пакпитаксела. Цель данной работы — изучить влияние полисахаридов Tussilago farfara L. на показатели опухолевого роста, периферической крови и костномозгового кроветворения в динамике на фоне полихимиотерапии мышей с карциномой легких Льюис цисплатином и пакпитакселом. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на мышах-самках линии C57BI/6 массой 19-20 г 1-й категории разводки лаборатории экспериментального биомоделирования НИИФиРМ им. Е.Д.Гольдберга (сертификат качества № 188-05). Животных содержали в соответствии с правилами Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях. Исследование проведено в соответствии с требованиями лабораторной практики (GLP), Приказа МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г. "Об утверждении правил лабораторной практики", ФЗ "О лекарственных средствах" (статья 36), "Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ". Методы выделения и изучения химической структуры полисахаридов Tussilago farfara L. (моносахаридный состав, определение содержания уроновых кислот) разработаны на базе центра внедрения технологий и лаборатории инновационных фармацевтических технологий СибГМУ (Томск), Данный полисахаридный комплекс состоит из двух основных компонентов: рамногалактуронана I (33%) и нейтральных полисахаридов (67%), представленных суммой арабиногалактана, рамнана и галакторамнана. Трансплантацию карциномы легких Льюис (LLC) проводили гомогенатом опухолевой ткани в стерильном физиологическом растворе. У животных-доноров вырезали кусочки опухоли без некротических участков, пропускали их через пресс-измельчитель, разводили физиологическим раствором в стеклянном флаконе до концентрации 10-20%, разбивали шприцем с иглой и фильтровали через стерильный капроновый фильтр. Количество опухолевых клеток подсчитывали в камере Горяева под микроскопом, доводили физиологическим раствором до нужной концентрации и перевивали внутримышечно по 5x106 клеток в 0.1 мл. Полисахариды вводили животным внутрибрюшинно в дозе 20 мг/кг курсом в течение 24 сут, начиная с 1 -х суток после перевивки опухоли. Цитостатики цисплатин ("Teva") в дозе 2.5 мг/кг, паклитаксел ("Dr Reddy's Laboratories LTD") в дозе 12 мг/кг мыши получали внутрибрюшинно трижды (на 7,8 и 9-е сутки после перевивки опухоли), интервал между введением каждого цитостатика составлял 20 мин. В качестве препарата сравнения использовали нейпоген ("Ф.Хоффманн-Ля Рош Лтд.", рекомбинантный КСФ, активное вещество филграстим), который растворяли 5% раствором глюкозы и вводили мышам подкожно в дозе 30 мг/кг в течение 5 сут, начиная с 9-х суток после перевивки опухоли. Периферическую кровь и костный мозг брали на анализ на 1,3,5 и 7-е сутки после третьего введения цитостатиков (10,12,14 и 16-е сутки после перевивки LLC). Для подсчета лейкограммы проводили микроскопическое исследование цитологических препаратов, окрашенных азуром ЙЙ-эозином. Общепринятыми гематологическими методами подсчитывали общее количество миелокариоцитов в костном мозге и определяли на мазках содержание отдельных клеточных форм. Измерение объема опухоли и подсчет показателя торможения роста опухоли (ТРО) проводили на 10, 16 и 21-е сутки после трансплантации LLC. Контролем служили животные с опухолью, получавшие физиологический раствор, объем и режим введения которого соответствовали таковым цитостатических препаратов. Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью U критерия Манна—Уитни. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Трехкратное введение цитостатиков по схеме "цисплатин+паклитаксел" приводило к угнетению гранулоцитарного ростка кроветворения вплоть до 7-х суток исследования, что выражалось в достоверном снижении общего количества миелокариоцитов за счет уменьшения числа зрелых и незрелых нейтрофильных гранулоцитов. Наиболее выраженное угнетение костномозгового кроветворения наблюдалось на 3-й сутки исследования: общее количество миелокариоцитов, число зрелых и незрелых нейтрофильных гранулоцитов было значимо ниже контрольных значений в 5.5, 4.8 и 5.8 раза соответственно (рис. 1). Изменениям, происходящим в костном мозге под воздействием полихимиотерапии, соответствовала и динамика содержания зрелых клеток в периферической крови. Введение цитостатиков приводило к развитию лейкопении, регистрировавшейся с 1-х по 7-е сутки исследования. Наиболее выраженное снижение показателей лейкоцитарной формулы наблюдалось на 3-й сутки исследования, что выражалось в многократном уменьшении общего количества лейкоцитов, числа сегментоядерных и палочкоядерных нейтрофилов по сравнению со значениями в контроле. Восстановления этих показателей до контрольных значений не наблюдалось и к окончанию периода наблюдения (рис. 2). Общее количество миелокариоцитов в костном мозге мышей, получавших полисахариды Tussilago farfara L. на фоне полихимиотерапии, было выше на протяжении всего эксперимента за счет повышенного числа незрелых и зрелых форм нейтрофильных гранулоцитов. Наиболее выраженное увеличение этих показателей относительно таковых у получавших только полихимиотерапию мышей наблюдались на 3-й сутки после проведения курса лечения: так, количество незрелых нейтрофильных грануцитов было выше в 3 раза (р<0.05), а число зрелых нейтрофилов в—2.6 раза (р<0.01) (рис. 1). В периферической крови мышей, получавших полисахариды совместно с антибластомными средствами, во все сроки наблюдения общее количество лейкоцитов было выше за счет числа палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов. Так, на пике лейкопении значение общего числа клеток белой крови в 4.7 раза превышало таковое у животных, получавших только противоопухолевые препараты (р<0.01). Количество сегментоядерных нейтрофилов, максимально (в 5 раз, р<0.01) превышающее эти значения у леченных только цитостатиками мышей, отмечалось на 3-й сутки эксперимента, число палочкоядерных — на 5-е сутки (рис. 2). Стимулирующее влияние нейпогена на показатели костномозгового кроветворения (рис. 1) и периферической крови (рис. 2) во все сроки наблюдения было сопоставимо с таковым при использовании полисахаридов Tussilago farfara L. Анализ динамики роста объема опухоли показал, что у мышей, получавших противоопухолевые препараты по схеме "цисплатин+паклитаксел", на 10,16 и 21-е сутки после трансплантации LLC объем первичной опухоли значимо уменьшался в 2.4,1.9 и 1.4 раза соответственно по сравнению с контролем, при этом показатель ТРО составил 58, 47 и 31% (таблица). При добавлении нейпогена в схему полихимиотерапии объем опухоли у животных уменьшался в 2.2 раза (р<0.01) только на 10-е сутки после перевивки LLC по сравнению со значением у получавших только цитостатики мышей, при этом показатель ТРО составил 80% (таблица). У животных, в схему полихимиотерапии которых входили полисахариды Tussilago farfara L., отмечено достоверное уменьшение среднего объема опухоли на 10-е и 21-е сутки (в 3.7 и 1.7 раза соответственно) по сравнению с показателями леченных только цитостатиками мышей. Максимальное значение ТРО (89%) в этой группе наблюдения зафиксировано на 10-е сутки исследования (таблица). Таким образом, полисахариды Tussilago farfara L. способствуют более быстрому восстановлению гранулоцитарного ростка кроветворения, предотвращая развитие нейтропении, вызванной введением цисплатина и паклитаксела, благодаря способности стимулировать выход созревших клеток из костного мозга в периферическую кровь. Кроме того, необходимо отметить повышение эффективности противоопухолевого действия полихимиотерапии при добавлении в схему лечения полисахаридов Tussilago farfara L. Стимулирующее действие на гранулоцитарный росток кроветворения при полихимиотерапии по схеме "цисплатин+паклитаксел" оказывали как полисахариды Tussilago farfara L, так и препарат сравнения нейпоген. В то же время динамика изменения показателей периферической крови под воздействием полисахаридов и нейпогена несколько различалась. Так, в данных группах комбинированного лечения общее количество лейкоцитов, число сегментоядерных и папочкоядерных нейтрофилов было выше, чем в группе только полихимиотерапии, на протяжении всего исследования. При этом увеличение общего количества лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов (5-е сутки опыта), числа палочкоядерных нейтрофилов (1-е сутки опыта) под воздействием нейпогена не было статистически значимым. Можно констатировать, что эффективность применения полисахаридов Tussilago farfara L. в схеме полихимиотерапии "цисплатин+пакпитаксел" оказалась сравнима с таковой у известного стимулятора гранулоцитарного ростка кроветворения нейпогена. Следует отметить, что рекомбинантные гемоцитокины обладают большим количеством побочных реакций. Существуют данные о возможной стимуляции роста опухолей при применении препаратов этого ряда. Еще один фактор, ограничивающий применение рекомбинантных гемоцитокинов, — это их высокая курсовая стоимость. Таким образом, полисахариды Tussilago farfara L. перспективны для дальнейшего исследования с целью создания на их основе новых препаратов, обладающих гемостимулирующими свойствами и повышающих эффективность противоопухолевой полихимиотерапии.

Авторы:

Издание: Бюллетень экспериментальной биологии и медицины
Год издания: 2018
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2018.-N 8.-С.152-156. Библ. 7 назв.
Просмотров: 26