МОДУЛИРУЮЩЕЕ ВЛИЯНИЕ ЛЕВОФЛОКСАЦИНА И БЦЖ НА СЕКРЕЦИЮ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ ПРИ ИНФИЛЬТРАТИВНОМ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ (ИССЛЕДОВАНИЕ IN VITRO)

Аннотация:

Исследовали влияние фторхинолона левофлоксацина и вакцинного штамма БЦЖ на продукцию цитокинов мононуклеарными лейкоцитами крови у больных инфильтративным туберкулезом легких. Комбинированное воздействие левофлоксацина и вакцинного штамма БЦЖ при лекарственно-устойчивом туберкулезе легких угнетало продукцию ФНОа, при лекарственно-чувствительном туберкулезе тормозило образование ИЛ-12 и ИФНу. Ключевые слова: левофлоксацин, туберкулез легких, мононуклеарные лейкоциты, цитокины. Фундаментальным принципом терапии лекарственно-устойчивого туберкулеза является применение противотуберкулезных средств резервного ряда. Среди резервных препаратов наибольшей химиотерапевтической активностью обладают фторхинолоны левофлоксацин и ломефлоксацин, их также можно назначать при лекарственно-чувствительном туберкулезе, если средства основного ряда вызывают опасные побочные эффекты. Фторхинолоны ингибируют ДНК-гиразу и топоизомеразу IV, нарушают отрицательное суперскручивание ДНК и оказывают бактерицидное влияние на микобактерии туберкулеза. На эффективность фторхинолонов значительное влияние оказывает их иммуномодулирующее действие. Особенно важно учитывать влияние фторхинолонов на иммунологическую реактивность у больных лекарственно-устойчивым туберкулезом, при котором часто возникает иммуносупрессия. Офлоксацин и моксифлоксацин подавляют в культуре моноцитов человека стимулированную эндотоксином и вызванную Л ПС продукцию ФНОа и ИЛ-6. Ципрофлоксацин и моксифлоксацин уменьшают синтез и секрецию ИФНу и ИЛ-4 без изменения соотношения Т-лимфоцитов-хелперов 1-го и 2-го типа в крови. В большинстве исследований установлено влияние фторхинолонов на секрецию цитокинов в культуре клеток, у здоровых доноров и лабораторных животных. Однако неизвестно, как фторхинолоны изменяют секреторную активность лейкоцитов у больных туберкулезом. Цель данного исследования — оценить in vitro влияние левофлоксацина совместно с вакциной БЦЖ на продукцию ИЛ-2, ИЛ-12, ИФНу и ФНОа мононуклеарными лейкоцитами крови у больных инфильтративным туберкулезом легких. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ. Обследовано 39 больных впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких и 15 здоровых доноров. Средний возраст обследуемых — 43.8±1.5 года. В исследование не включали пациентов моложе 18 и старше 55 лет, больных, инфицированных вирусом гепатита и ВИЧ, а также страдающих другими инфекциями в стадии обострения, аллергическими и аутоиммунными заболеваниями. В зависимости от чувствительности микобактерий к противотуберкулезным средствам все больные были разделены на две группы. Первую группу составили 24 пациента, выделявших микобактерии туберкулеза, чувствительные к основным противотуберкулезным средствам (рифампицину, изониазиду, этамбутолу), во вторую группу были включены 15 больных, выделявших микобактерии, устойчивые к одному и более лекарственному средству основного ряда. Лекарственную чувствительность микобактерий туберкулеза определяли методом абсолютных концентраций в среде Левенштейна— Йенсена. До начала противотуберкулезной химиотерапии утром натощак брали кровь из локтевой вены в количестве 10 мл. Мононуклеарные лейкоциты, выделенные из цельной крови методом градиентного центрифугирования, культивировали в полной среде RPMI-1640. В инкубационную среду вносили вакцинный штамм БЦЖ ("Микроген") в дозе 50 мкг/мл или субстанцию левофлоксацина ("Sigma-Aldrich") в дозе 5 мкг/мл (сопоставимую с дозой лекарственного средства при его клиническом применении) в комбинации с БЦЖ. Контролем служила инкубационная среда без добавления БЦЖ и левофлоксацина. Для оценки секреции цитокинов в супернатантах культуры мононуклеарных лейкоцитов методом твердофазного ИФА согласно инструкциям к тест-системам определяли концентрации ИЛ-2 ("Цито-кин"), ИЛ-12 ("Bender Medsystems"), ИФНу ("Вектор-Бест") и ФНОа ("Цитокин"). Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью программы "Statistica 6.0". Нормальность распределения количественных показателей проверяли согласно критерию Шапиро—Уилка. Для каждой выборки рассчитывали медиану (Me), нижний (25%) и верхний (75%) квартиль (Q1-Q3)- Достоверность различий зависимых выборок оценивали по непараметрическому критерию знаковых рангов Вилкоксона, независимых выборок — по непараметрическому U критерию Манна—Уитни. Различие двух сравниваемых величин считали достоверным при уровне значимости р<0.05. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. В супернатантах культуры мононуклеарных лейкоцитов у больных лекарственно-устойчивым туберкулезом легких содержание ИФНу оказалось в 2.5 раза меньше, чем у здоровых доноров, количество ФНОу снижалось в 1.9 раза, ИЛ-12 — возрастало в 4.8 раза (табл. 1, 2). Известно, что продукция ИФНу может уменьшаться по причине гипосекреции ИЛ-27 и ИЛ-12, низкой экспрессии их рецепторов на Т-лимфоцитах, нарушений внутриклеточной передачи сигнала активации от рецептора к ИЛ-12 из-за дефицита тирозиновых киназ и транскрипционных факторов, стимулирующих экспрессию гена синтеза ИФНу. У больных лекарственно-чувствительным туберкулезом легких регистрировалось увеличение секреции ИФНу в 2.2 раза, концентрация ИЛ-12 и ФНОа в культуральных супернатантах не изменялась (табл. 1,2). После добавления БЦЖ в культуры мононуклеарных лейкоцитов у больных лекарственно-устойчивым и лекарственно-чувствительным туберкулезом легких содержание ИЛ-12 в супернатантах уменьшалось, соответственно, в 4.7 и 2.2 раза по сравнению с показателем спонтанной секреции цитокина (табл. 1). Содержание ИФНу в культуре при добавлении БЦЖ у больных лекарственно-устойчивым туберкулезом легких возрастало в 5 раз. При лекарственно-чувствительном туберкулезе вакцина БЦЖ не изменяла концентрацию этого цитокина в супернатантах культуры лейкоцитов (табл. 1). У всех больных вакцина БЦЖ не влияла на содержание ИЛ-2 и ФНОа (табл. 2). При внесении субстанции левофлоксацина и БЦЖ в культуру мононуклеарных лейкоцитов у больных лекарственно-устойчивым туберкулезом легких в супернатантах содержание ФНОа уменьшалось по отношению к его количеству только при добавлении одного БЦЖ. Уровень других цитокинов не изменялся. При лекарственно-чувствительном туберкулезе содержание ИЛ-12 и ИФНу снижалось (табл. 1,2). Доказано, что при туберкулезе легких основную протективную функцию выполняют дендритные клетки, макрофаги и CD4+ Т-лимфоциты-хелперы 1-го типа. Субпопуляция CD4+лимфоцитов продуцирует ИФНу и ИЛ-2. ИФНу повышает в моноцитах/макрофагах экспрессию ТоН-подобных рецепторов, молекул главного комплекса гистосовместимости I и II классов, продукцию ИЛ-1, ИЛ-12, ИЛ-18, ФНОа, супероксидных и нитроксидных радикалов. ИЛ-27 (продукт активации дендритных клеток), ИЛ-12 и в меньшей степени ИЛ-2 и ФНОа стимулируют синтез ИФНу. ИФНу совместно с ФНОа значительно увеличивает образование оксида азота индуцируемой синтазой, свободные радикалы оксида азота вызывают в макрофагах гибель высоковирулентных штаммов микобактерий туберкулеза. Фторхинолоны, включая левофлоксацин, обладают высокой липофильностью и хорошо проникают в клетки простой диффузией. Установлено, что моксифлоксацин препятствует инактивации белка-ингибитора ядерного фактора транскрипции кВ (1кВ) в мононуклеарных лейкоцитах и клетках линии ТНР-1. В этих клетках нарушается активация фактора кВ и митогенактивируемых протеинкиназ —ERK1/2 (extracellular regulated kinases), JNK (c-Jun N-terminal kinase) с уменьшением стимулированной Л ПС секреции ИЛ-1 р, ИЛ-8 и ФНОа. Реакция мононукпеарных лейкоцитов, выделенных из крови больных лекарственно-устойчивым и лекарственно-чувствительным туберкулезом легких, на воздействие вакцины БЦЖ и левофлоксацина значительно различается. При лекарственно-устойчивом туберкулезе содержание ИЛ-12 в супернатантах культуры лейкоцитов было выше, а содержание ФНОа — ниже, чем у больных лекарственно-чувствительным туберкулезом. Показатели секреции ИЛ-2 и ИФНу достоверно не различались у этих групп больных инфильтративным туберкулезом легких (табл. 1,2).

Авторы:

Издание: Бюллетень экспериментальной биологии и медицины
Год издания: 2018
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2018.-N 8.-С.182-185. Библ. 15 назв.
Просмотров: 65