Дальневосточный государственный медицинский университет Поиск | Личный кабинет | Авторизация
Поиск статьи по названию
Поиск книги по названию
Каталог рубрик
в коллекциюДобавить в коллекцию

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СПОСОБА ИДЕНТИФИКАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ДИСБАКТЕРИОЗА КИШЕЧНИКА


Аннотация:

Представлены результаты исследований по разработке нового способа идентификации цитратассимилирующих энтеробактерий. В последние годы, ввиду значительного увеличения циркуляции этих микроорганизмов у лиц с дисбиотическим состоянием кишечника, возникла необходимость в большем объеме их идентификации. Предлагается простой и не затратный способ идентификации этой группы микроорганизмов при помощи ограниченного набора тестов. Способ защищен патентом на изобретение. Ключевые слова: условно-патогенные бактерии (УПБ), цитратассимилирующие энтеробактерии. Проблема дисбактериоза кишечника продолжает оставаться актуальной, несмотря на значительное количество научных и научно-практических работ в этой области, регистрируемое в последнее время. Актуальность проблемы во многом связана со значительной распространенностью этого состояния как у детей, так и у взрослых, формирующегося под влиянием различных факторов, имеющих непрекращающуюся тенденцию к росту. В ходе микробиологической диагностики этого нарушения выяснилось, что свыше 70,0% всех дисбактериозов связано с увеличением в микробном пейзаже условно-патогенных бактерий (УПБ), в том числе, цитратассимилирующих энтеробактерий. К цитратассимилирующим бактериям семейства Enterobacteriacaeae относятся представители различных родов и видов, обладающие способностью использовать цитрат натрия как единственный источник углерода. При посеве такого микроорганизма на питательную среду, содержащую цитрат натрия (среду Симмонса), в ходе реакции происходит сдвиг РН в щелочную сторону, в результате чего среда окрашивается в ярко-синий цвет (исходная среда имеет зеленую окраску). К наиболее часто встречаемым в медицинской практике цитратассимилирующим энтеробак-териям относятся: род Клебсиелла -«.pneumoniae (с подвидами пневмонии, озены и риносклерома-тис), K.oxytoca; род Цитробактер - C.amalonaticus, C.freundii, C.koseri, C.youngae; род Энтеробактер - E.aerogenes, Е.cloacae; род Серрация - S.marcescens, S.plymuthica, S.rubidaea; род Провиденция; род Протеус - P.vulgaris, P.mirabilis. Эти микроорганизмы являются условно-патогенными. Они в незначительных количествах могут находиться в толстом отделе кишечника человека, составляя его так называемую «нормальную» микрофлору. При дисбиотических нарушениях кишечника (дисбактериозе) количество условно-патогенной микрофлоры, и в том числе цитратассимилирующих бактерий, может значительно увеличиться и превысить возрастную норму, что выявляется при целенаправленной микробиологической диагностике и требует соответствующего лечения. Кроме того, нельзя не учитывать и факт значительного увеличения изоляции при дисбактериозах кишечника многокомпонентных микробных ассоциаций, в состав которых, как правило, входят цитратассимилирующие бактерии, а также возможно сти этих микроорганизмов вызывать инфекционные заболевания с кишечной и внекишечной локализацией. Идентификации, как таковой, группы цитратассимилирующих бактерий, дающих возможность определить не только род, но и вид, а иногда и подвид, используя при этом ограниченный набор тестов, в доступной нам литературе не встретилось . Наибольшую популярность в последние годы приобрели автоматические бактериологические анализаторы для микрообъемной идентификации, в том числе, энтеробактерий. В нашей стране широкое распространение получил метод идентификации бактерий с помощью баканализатора Vitek - 2 Compact (производства фирмы Bio Merieux, Франция). Подобной техникой оснащены крупные лаборатории и медицинские центры. Такого типа баканализаторы позволяют быстро, без значительных физических затрат и при этом с большой точностью идентифицировать значительное число известных микроорганизмов. Однако большим недостатком идентификации микроорганизмов с помощью этого баканализатора является высокая стоимость как самой аппаратуры, так и расходных материалов к ней, что делает невозможным исследование большого объема материала; кроме того, такая аппаратура едва ли доступна для маленьких лабораторий или других небольших медучреждений. При использовании подобных анализаторов для идентификации цитратассимилирующих энтеробактерий происходит необоснованный расход тест-систем, так как для каждого штамма микроорганизма аппарат использует 64 диагностических теста, тогда как цитратассимилирующие бактерии не требуют такого количества, а могут быть определены с помощью гораздо меньшего набора, что позволяет значительно удешевить их идентификацию, сохранив при этом достаточно высокую точность. Известен ряд методов идентификации энтеробактерий, число и эффективность которых из года в год повышается. Наиболее востребованными и достаточно точными являются макро- и микрообъемные методы биохимической идентификации: использование СИБов - систем индикаторных бумажных, ПБДЭ - пластин биохимических, диагностирующих энтеробактерии - обе системы производства «Микроген», г. Нижний Новгород . Однако обе эти системы не лишены недостатков, так, для системы ПБДЭ необходимо наличие большого числа (20) лунок с субстратами и требуется использования таких тестов, которые при идентификации цитратассимилирующих бактерий могут быть опущены или заменены другими. Кроме того, при использовании этой системы нередко бывают затруднения при учете результатов в связи с недостаточным размером лунки, что сказывается как на точности посева, так и - на учете результатов. Наиболее близким является способ использования СИБов, дающий возможность провести идентификацию с помощью 13 тестов, но он неудобен технически, требует значительных затрат рабочего времени, лабораторной посуды с предварительным ее мытьем, заготовкой, стерилизацией и некоторыми другими манипуляциями, что также увеличивает время выполнения исследования, трудозатраты и, в конечном итоге - его стоимость. Кроме того, способ с использованием СИБов обладает низкой глубиной идентификации: он предназначен только для межродовой и межвидовой идентификации и не способен определить подвид микроорганизма. Цель исследования - разработка способа идентификации цитратассимилирующих энтеробактерий с использованием ограниченного набора тестов. Материалы и методы. Материалом для исследования служили цитратассимилирующие условно-патогенные энтеробактерии, изолированные из фекалий 490 детей и взрослых с выявленными дисбиотическими нарушениями. Основными диагностирующими тестами были: учет образования индола и сероводорода (на МПБ или 1% пептонной воде), подвижности (на 0,3 % агаре) и ассимиляции цитрата натрия (на среде Симмонса). Всего в параллельных опытах изучено 150 культур цитратассимилирующих энтеробактерий. Исследование кишечной микробиоты и оценку результатов проводили по стандартной методике , идентификацию штаммов УПБ - классическим микробиологическим методом, с помощью СИБов «Микроген» (Нижний Новгород), баканализатора Vitec 2 Compact 30 и предлагаемого нами способа. Результаты и обсуждение. Результаты проделанной работы позволили предложить новый способ идентификации цитратассимилирующих энтерорбактерий .В предлагаемом способе, включающем пересев изучаемой колонии микроорганизмов, выросших на средах Эндо или Симмонса, первичная идентификация производится с использованием ограниченного набора тестов, индолообразования, продукции сероводорода, подвижности и утилизации цитрата натрия, по характеру изменения которых изучаемые микроорганизмы вначале подразделяются на шесть условных групп, а в дальнейшем, в зависимости от принадлежности к определенной группе, используется основной и, при необходимости, дополнительный для каждой группы тест, а именно: лизин и при необходимости мочевина - для I группы; лизин и, при необходимости, (последовательно) сорбит, аргинин и рамноза - для III группы; фенилаланин, а в дальнейшем малонат натрия - для 1\/группы; фенилаланин и в дальнейшем лактоза - для VI группы; бактерии II и V группы идентифицируются только по первичным тестам (табл.1). В схему включены роды, виды, и подвиды цитратассимилирующих энтеробактерий в соответствии с [10,14]. Способ осуществляется следующим образом: чистую культуру изучаемого микроорганзма, выросшую на чашечных средах Эндо или Симмонса, засевают на мясо-пептонный бульон (МПБ) или 1% пептонную воду (для определения продукции индола и сероводорода), на 0,3% полужидкий мясо-пептонный агар (для определения подвижности) и на пробирочную среду Симмонса (для определения утилизации цитрата натрия). В том случае, если изучаемый штамм изолирован со среды Симмонса, посев на эту среду в пробирке не делается. После инкубации посевов в термостате при 370 С в течение 18 - 20 час производят учет результатов; при этом идентифицируемые микроорганизмы в зависимости от изменения указанных субстратов могут быть отнесены к одной из шести групп: к I группе относятся неподвижные бактерии, не продуцирующие индол и сероводород и ассимилирующие цитрат натрия при росте на среде Симмонса Klebsiella pneumoniae с подвидами (ssp. pneumoniae, ssp.ozenae, ssp. rhinoscle- romatis), основным тестом для дифференциации которых является лизин, а дополнительным - мочевина. ко II группе относятся неподвижные бактерии, продуцирующие индол, не образующие сероводород и ассимилирующие цитрат натрия; в эту группу входит только единственный вид - Klebsiella oxytoca, который окончательно дифференцируется уже по первичным тестам. III группа включает подвижные бактерии, не продуцирующие индол и сероводород и утилизирующие цитрат натрия - Enterobacter cloacae ssp.cloacae, Enterobacter aerogenes, Serratia marcescens, Serratia plymuthica и Serratia rubidaea, основной дифференцирующий тест группы - лизин, дополнительные тесты - сорбит и аргинин и при необходимости дальнейшей идентификации - рамноза. IV группа включает подвижные штаммы, образующие индол и не образующие сероводород, а также ассимилирующие цитрат натрия - Citrobacter amalonaticus , Citrobacter koseri, а также бактерии рода Providencia. Основной дифференцирующий тест группы - фенилаланин, дополнительный -малонат натрия. V группа объединяет подвижные штаммы, продуцирующие индол и сероводород и ассимилирующие цитрат; сюда, как и во II группу, относится единственный вид - Proteus vulgaris, который дифференцируется по первичным четырем тестам (отдельные штаммы этого микроорганизма могут не утилизировать цитрат). Роды и виды бактерий, составляющие VI группу, подвижны, не продуцируют индол и продуцируют сероводород, в большинстве утилизируют цитрат натрия - Proteus mirabilis, Citrobacter freundii, Citrobacter youngae. Основной дифференцирующий тест группы - фенилаланин, дополнительный - лактоза.Для сравнения основных параметров предлагаемого способа было произведено параллельное изучение одних и тех же штаммов цитратассимилирующих энтеробактерий с использованием трех способов: с помощью индикаторных дисков (СИБ), производства «Микроген», Нижний Новгород, баканализатора Vitek- 2 Compact 30, производства фирмы «Bio Merieux, Франция и предлагаемого способа. Результаты, полученные при этом, свидетельствуют о высокой точности предлагаемого способа, практически не уступающего способам сравнения. Кроме того предлагаемый способ дает возможность идентифицировать большинство микроорганизмов не только до рода и вида, но и до подвида, также, как при использовании высокоточного способа с использованием баканализатора Vitek- 2 Compact 30, тогда как способ с использованием СИБов идентифицирует только до рода и вида. Количество используемых тестов значительно меньше у предлагаемого, чем у способов сравнения. Стоимость исследования одного микроорганизма у предлагаемого способа в 1,5 раза меньше, чем при применении СИБов, и в 5,4 раза ниже, чем при использовании баканализатора Vitek- 2 Compact 30. Кроме того, предлагаемый способ поможет проводить идентификацию цитратассимилирующих штаммов энтеробактерий без использования импортной техники и расходных материалов, что является своего рода средством импортозамещения. Способ был внедрен в работу лаборатории бактериальных инфекций ФБУН Хабаровский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора. В течение последних трех лет с помощью предлагаемого метода нами было идентифицировано более 450 штаммов цитратассимилирующих энтеробактерий, изолированных от лиц с дисбиоти-ческими нарушениями кишечника. Выводы: 1. Разработан новый способ идентификации цитратассимилирующих энтеробактерий , дающий возможность определить не только их род, но и вид и даже подвид, используя при этом ограниченный набор тестов. 2.Способ обладает высокой точностью, требует минимального набора питательных сред и незначительных трудозатрат, а стоимость его в несколько раз ниже всех использованных в исследовании способов идентификации. 3. Указанный способ идентификации может быть применен при проведении исследований на выявление дисбиотических нарушений кишечника, а также при диагностике инфекционных заболеваний, как кишечной, так и внекишечной локализации, обусловленных УПБ.

Авторы:

Завгородняя Е.Ф.
Шмыленко В.А.

Издание: Дальневосточный журнал инфекционной патологии
Год издания: 2018
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2018.-N 34.-С.71-77. Библ. 14 назв.
Просмотров: 273

Рубрики
Ключевые слова
bioVISION
citrobacter
cloacae
enterobacter
freundii
iva
klebsiella
marcescens
mirabilis
pneumoniae
proteus
providencia
rh
serratia
vulgaris
автоматический
агар
агаровом
акты
анализатор
аппарат
аппаратура
аргинин
ассимиляция
ассоциации
бака
бактериального
бактерии
бактериология
биохимическая
болезни
болеющие
большая
бумажные
быстрый
бытовые
взрослые
видовая
виды
включения
включениями
влияние
внедрение
внекишечный
вода
возможности
возрастные
восток
временная
время
встречный
входной
вывод
вызывать
выполнение
высокий
выявление
выявленный
глубины
года
годовые
горы
групп
дальний
детей
диагностика
диагностическая
диагностические
диагностических
дисбактериоз
дисбиотический
дифференциация
дополнительные
доступ
другого
единственная
заболевания
зависимости
заготовка
замена
затрата
зеленого
идентификации
идентификация
изменение
изобретения
изолированное
изоляция
изучение
изучению
импорт
индикатор
индолы
инкубация
инфекцией
инфекции
инфекционная
использование
использованием
исследование
источник
исход
итоги
кишечная
кишечник
кишечника
кишечные
классическая
клебсиелла
клинические
ключ
количество
конечные
край
крупного
культур
лаборатории
лабораторная
лабораторные
лактоза
лет
лечение
лизин
литература
лицами
локализации
луна
лунка
макро-
малого
малонаты
манипуляция
материал
материалов
медицинская
медовый
метод
методика
методов
методы
микроб
микробиологи
микробиологическая
микробная
микробы
микроорганизмов
микроорганизмы
микрофлора
минимально
многокомпонентный
мочевина
мытье
набор
наибольшая
наличия
нарушения
натрий
научной
небольших
недостаточное
незначительная
необходимости
нескольким
нижная
низкие
новгород
новые
нормы
областей
оболочка
образ
образование
образующая
обусловленные
общепринятые
объем
ограниченные
одного
окраска
определение
определения
определенного
оснащение
основной
отдел
отдельные
оценка
паразитарные
параллель
параметр
патенты
пептоны
первичная
питательная
пластины
пневмонией
подвид
подвижная
подвижности
подобные
поза
пола
полужидкая
помощи
посев
после
послед
посуда
правила
практика
практическая
предварительной
представители
применение
применения
принадлежности
пробирки
проблема
проведение
продукция
производства
простая
протей
процедура
работа
рабочая
различный
размер
разработка
рамноза
распространение
распространенность
расходов
реакцией
регистр
результата
риносклерома
родами
родовые
роды
роспотребнадзор
росте
ряда
свидетельства
связей
сдвиг
семейства
сероводород
серый
систем
след
слизистая
слова
случаев
содержащая
соответствие
сорбит
состав
состояние
способ
способности
сравнение
среда
средств
стандартные
стерилизация
стоимости
стран
субстратов
схема
термы
тест-система
тест
теста
тестовые
тесты
техника
техническая
технологии
технологий
течения
типа
толстая
точная
трудозатраты
труды
увеличение
увеличить
углерод
указ
условнопатогенный
условные
усовершенствование
утилизация
учет
фактор
факторы
фекалии
фенилаланин
физические
фирма
франций
хабаровский
характер
цвет
цель
целях
центр
циркуляция
цитрат
часы
чашечке
человек
четыре
число
чистая
шесть
широкая
штамм
штаммы
щелочная
энтеробактер
энтеробактериальные
энтеробактерии
эпидемиология
эффективность
Ваш уровень доступа: Посетитель (IP-адрес: 18.97.14.87)
Яндекс.Метрика