СРАВНИТЕЛЬНОЕ ВЛИЯНИЕ ЦЕЛЕКОКСИБА, МЕЛАТОНИНА И ИХ КОМБИНАЦИИ НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ И МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА У КРЫС С ФОРМАЛИНОВЫМ АРТРИТОМ

Аннотация:

В опытах на крысах с моделированием артрита изучены гематологические и морфологические показатели противовоспалительного эффекта целекоксиба и эпифизарного гормона мелатонина в разных дозах. При сочетании подпороговых для ограничения воспалительного процесса доз целекоксиба (1 мг/кг) и мелатонина (0,01 мг/кг) при ежедневном внутри-брюшинном введении веществ обнаружен явный синергизм (снижение числа лейкоцитов до 10,3 х 10 в 9 степени/л, восстановление оптимального соотношения между лимфоцитами и нейтрофилами, снижение лимфоцитов до 27,5, макрофагов до 31,5 и прирост фибробластов до 90,5 в поле зрения в инфильтрате параартикулярных тканей), который может быть востребован в клинических условиях. Ключевые слова: артрит; целекоксиб; мелатонин; комбинация веществ. ВВЕДЕНИЕ: По современным представлениям, целекоксиб (ЦК) является одним из основных препаратов базисной терапии при воспалительном поражении суставов различной этиологии. Несмотря на сравнительно низкую токсичность ЦК, его клиническое применение порой сопровождается побочными реакциями со стороны сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта. Их существование побуждает к поиску путей оптимизации действия ЦК. Одним из них могло бы служить повышение эффективности ЦК в низких дозах за счет сочетания с веществами, обладающими сходным профилем фармакологической активности, но лучшей переносимостью. На такую роль может претендовать эпифизарный гормон мелатонин (МТ), у которого удачно сочетается высокая безопасность с болеутоляющим и противовоспалительным действием. В связи с этим представлялось интересным на модели формалинового артрита у крыс дать сравнительную оценку противовоспалительной активности ЦК и МТ в широком диапазоне доз, а также при их сочетании в подпороговых для ограничения воспалительной реакции дозах. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: В опытах использованы белые беспородные крысы-самцы массой 180 - 220 г (питомник ФГБНУ ВИЛАР, Москва), содержавшиеся в условиях вивария при естественном освещении, со свободным доступом к корму и воде. Выполнено 3 серии опытов на 115 животных. В первой серии (40 животных) изучены противовоспалительные свойства ЦК в разных дозах, во второй (50 крыс) — МТ, в третьей (25 животных) - сочетанное действие обоих веществ. В каждой из этих серий была контрольная группа крыс, получавших физиологический раствор. Его, как и растворы ЦК (целебрекс, Pfizer, Германия) и МТ (Мелаксен, Unipharm, США), применяли внутрибрюшинно в равных объемах. Твердую лекарственную форму переводили в порошок и получали суспензию, растворенную в физиологическом растворе. Предварительно моделировали артрит у крыс однократным введением 0,1 мл 2% раствора формалина в полость сустава плюсны. Спустя 3 сут, на протяжении недели (ежедневно) в одно и то же время (17.30) животным вводили растворы изучаемых препаратов. Учитывая хронобиологические особенности изучаемых веществ (МТ и его комбинации), в каждой серии для одних и тех же доз эффект оценивался независимо и отдельно. Эффект веществ оценивали после проведенного курса инъекций с помощью анализа крови и гистологического исследования мягких тканей пораженного сустава. В крови подсчитывали число лейкоцитов (классическим способом в счетной камере Горяева), лейкоцитарную формулу (в мазках крови при окраске по Романовскому — Гимза), а также определяли скорость оседания эритроцитов по методу Панченкова. Кровь для исследования получали из хвостовой вены. После завершения эксперимента животных умерщвляли декапитацией. Конечность препарировали от кожи, вскрывали полость сустава и оценивали состояние суставных поверхностей, характер экссудата. Для дальнейшего патоморфологического исследования использовали выделенный сустав плюсны и окружающие его ткани, фиксированные в 10% растворе формалина и окрашенные по стандартной методике гематоксилином-эозином. Морфометрию осуществляли под счетом числа клеток (лимфоцитов, гистиоцитов, макрофагов, нейтрофилов и фибробластов) в одном поле зрения (ув. 10 х 40), микроскоп Биомед 5 (Россия, Санкт-Петербург), в околосуставной ткани (область наибольшей инфильтрации). В качестве результата по одному животному учитывали среднее арифметическое число клеток, подсчитанных в 20 полях зрения. Статистическую достоверность результатов по сравнению с контролем (введение физиологического раствора) оценивали с помощью парного - критерия Стьюдента для независимых совокупностей. Все эксперименты проведены с соблюдением международных принципов Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, 1986). РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ У животных контрольных групп, получавших физиологический раствор, отмечали значительный лейкоцитоз (в пределах 20 • 10 в 9 степени/л). Среди белых клеток крови преобладали (66-70%) лимфоциты. В параартикулярных тканях определялся выраженный отек и разрыхление коллагеновых волокон, а также густой клеточный инфильтрат, состоящий преимущественно из лимфоцитов (76,9-98 в поле зрения), макрофагов (61,2-104 в поле зрения) и гистиоцитов. Фибробласты, характеризующие активность регенерации, составляли наименьшее количество клеток (30,1-55,5 в поле зрения). Сосуды отличались полнокровием, преобладали процессы экссудации. Местами отмечались участки кровоизлияний. Описанная картина соответствует остро протекающему серозно-геморрагическому воспалению. По разным литературным источникам и исходя из наших собственных наблюдений, норма лейкоцитов в крови крыс составляет в среднем 9,0 • 10 в 9 степени/л, а референсные значения лейкограммы крыс близки к таковым для человека. В эффективной дозе (5 мг/кг) ЦК ограничивал воспалительный процесс. Об этом свидетельствовало достоверное снижение числа лейкоцитов до нормальных значений, менее 11,8 • 10 в 9 степени/л (рис. 1). Согласно результатам лейкограммы, отмечалась явная тенденция к восстановлению оптимального соотношения между клетками гранулоцитарного звена и лимфоцитами. На срезах сустава и окружающих его тканей у крыс, получающих ЦК, определялись участки скудно выраженного отека и слабое разрыхление коллагеновых волокон. Клеточный инфильтрат был распределен неравномерно в виде единичных очагов и представлен преимущественно лимфоцитами, в меньшей степени макрофагами. Большое количество фибробластов (70,2-111,7 в поле зрения) указывало на высокую активность регенерации соединительной ткани (рис. 2). Характерны участки образования созревающей и зрелой грануляционной ткани, диффузный неоколлагеногенез, новообразование сосудов. В то же время при введении ЦК в низкой дозе (1 мг/кг) явные признаки разрешения воспалительного процесса отсутствовали. На это указывало повышенное количество лейкоцитов (более 25 х 10 в 9 степени/л), а также преобладание агранулоцитов в лейкоцитарной формуле (рис. 1, а, б). По данным морфологического исследования регенерация протекала вяло, либо отсутствовала в целом. МТ оказывал сходное дозозависимое противовоспалительное действие. Его введение в большей из использованных доз (0,1 мг/кг) сопровождалось значимым снижением числа лейкоцитов (рис. 1). Аналогичная ситуация прослеживалась и в лейкоцитарной формуле — количество лимфоцитов снизилось до 49,6%, что привело к относительному увеличению доли сегментоядерных нейтрофилов. Гистологическое исследование свидетельствовало о наличии слабого отека параартикулярной ткани, а разрыхление коллагеновых волокон фактически отсутствовало. Скудный фокальный клеточный инфильтрат образован макрофагами и лимфоцитами. Характерно преобладание продуктивных процессов, что подтверждается значительным присутствием фибробластов (рис. 2), активно вырабатывающих коллаген, наличием грануляционной и рыхлой волокнистой соединительной ткани. Подпороговый для ограничения воспаления эффект зарегистрирован после введения минимальной из использованных доз МТ (0,01 мг/кг). Существенные для настоящей работы результаты были получены в третьей серии опытов при сочетании подпороговых для противовоспалительного эффекта доз ЦК (1 мг/кг) и МТ (0,01 мг/кг). Совместное введение препаратов сопровождалось достоверным снижением количества лейкоцитов более чем в 2 раза (10,3 • 10 в 9 степени/л), при этом, по данным лейкограммы, зарегистрированные изменения происходили преимущественно за счет агранулоцитов (рис. 1). В ходе гистологической верификации зафиксировано фактически полное отсутствие отека и разрыхления коллагеновых волокон. Клеточный инфильтрат достоверно претерпел качественные и количественные изменения. Лимфоциты и макрофаги определялись паравазально (очагами) в незначительных количествах, а строма мягких тканей оказывалась выполнена основными источниками регенерации — фибробластами (рис. 2). Изложенные факты позволяют констатировать 2 наиболее значимых момента: близость противовоспалительной активности изученных веществ, представляющих разные фармакологические группы, и способность МТ усиливать специфическое действие ЦК при их сочетанном введении. Сходство противовоспалительного эффекта может определяться тем, что в его основе лежат близкие клеточные механизмы. Для ЦК, как известно, в первую очередь это связано с его избирательной способностью ингибировать чрезмерную активность циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2) с последующим ограничением синтеза простагландинов. По мнению М. Zweers, et al., торможение ЦОГ-2 ослабляет зависимые от этого процессы — инфильтрацию синовии лимфогистиоцитарными клетками, развитие гиперплазии синовиальных фибробластов и патологический неоангиогенез. Весьма показательны в рамках данного исследования результаты Н. Gebhard, et al., изучавших влияние ЦК на торможение хемотаксиса белых клеток крови при индуцированном артрите. Такого рода действие препятствует проникновению лейкоцитов через эндотелиальную выстилку сосудов и, следовательно, задерживает клетки в кровотоке. Представленные факты согласуются и с нашими собственными результатами, поскольку применение ЦК не приводило к полному нивелированию лейкоцитоза. Вероятно, это связано с задержкой лейкоцитов в системном кровотоке, так как мягкие ткани при введении препарата в пороговой дозе подверглись минимальной воспалительной инфильтрации. Кроме того, протективное действие ЦК может определяться подавлением образования внутриклеточных "переносчиков" воспалительного сигнала, таких как NF-кВ и RANKL (лиганд рецептора активатора NF-кВ), стимулирующих синтез провоспалительных цитокинов и активацию остеокластов. Эффекты МТ оказались во многом сходны с действием ЦК и могут базироваться на близких клеточных механизмах, включая ингибирование ЦОГ-2 и ядерного фактора кВ. Поскольку любые формы клеточной альтерации, в том числе воспалительного характера, сопровождаются усилением процессов окислительного стресса, особое значение для фармакодинамики МТ, несомненно, приобретает его способность выступать в роли мощного естественного антиоксидантного агента. Это действие МТ дополняется своеобразными иммуно-модуляторными свойствами данного препарата. Указанные моменты могут лежать в основе описанного синергизма ЦК и МТ. Следует отметить, что данный факт не является оригинальной находкой, поскольку ранее он уже был показан в виде оптимизирующего влияния МТ на специфическую активность индометацина и оксикама из числа классических нестероидных противовоспалительных средств. Таким образом, ЦК и гормональный препарат МТ на модели воспалительного артрита у крыс по гематологическим и морфологическим критериям имеет сходную противовоспалительную активность. Их сочетанное применение в подпороговых для противовоспалительного эффекта дозах обнаруживает явный синергизм. Последний момент, по нашему мнению, позволяет рекомендовать введение МТ в комплексную терапию воспалительных процессов после клинических исследований. С учетом низкой токсичности МТ это позволило бы избежать назначения нестероидных противовоспалительных средств в высоких дозах и тем самым ограничить частоту и выраженность вызываемых ими побочных реакций. ВЫВОД: Комбинация целекоксиба (1 мг/кг) и мелатонина (0,01 мг/кг) ежедневно внутрибрюшинно в течение недели вызывала снижение числа лейкоцитов до 10,3 • 10 в 9 степени/л, восстановление оптимального соотношения между лимфоцитами и нейтрофилами, снижение лимфоцитов до 27,5, макрофагов до 31,5 и прирост числа фибробластов до 90,5 в поле зрения в инфильтрате параартикулярных тканей у крыс с моделью формалинового артрита.

Авторы:

Издание: Экспериментальная и клиническая фармакология
Год издания: 2018
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2018.-N 6.-С.20-23. Библ. 12 назв.
Просмотров: 69