Дальневосточный государственный медицинский университет Поиск | Личный кабинет | Авторизация
Поиск статьи по названию
Поиск книги по названию
Каталог рубрик
в коллекциюДобавить в коллекцию

Роль сигнального пути Sonic Hedgehog в формировании плоскоклеточного рака слизистой оболочки рта


Аннотация:

Изучение активности сигнального пути Sonic Hedgehog (SHH) проводилось на биоптатах слизистой оболочки рта (СОР) 43 пациентов с диагнозами очаговой эпителиальной гиперплазии, плоскоклеточной внутриэпителиальной неоплазии (SIN) и плоскоклеточного рака (ПР) СОР. Тканевые антигены определяли с помощью мышиных моноклональных антител к белку Ki-67 и кроличьих моноклональных антител к белку Gli-1. В проведенном исследовании эффекторный белок сигнального пути SHH Gli-1 выявлен в цитоплазме клеток только при SIN ПР СОР. Обнаружена высокая корреляционная связь между пролиферативной активностью эпителиальных клеток и синтезом в них белка Gli-1. Белок Gli-1 может служить маркером ранней диагностики злокачественной трансформации клеток многослойного плоского эпителия СОР. Ключевые слова: иммуногистохимическое исследование, плоскоклеточный рак, Ki-67, Sonic Hedgehog, Gli-1. В молекулярных механизмах формирования раковых опухолей принимают участие различные сигнальные пути, которые отвечают за регуляцию клеточной пролиферации, миграцию клеток и апоптоз. Одним из подобных сигнальных путей является Sonic Hedgehog (SHH), который в норме функционирует в эмбриональных и стволовых соматических клетках. В условиях патологии его активация происходит при злокачественной трансформации клеток. Эффекторным белком данного сигнального пути является белок Gli-1. Он содержит цинк-пальцевый домен, способствующий связыванию с участком ДНК, который необходим для контроля транскрипции пути SHH. Поскольку отмечается тенденция к увеличению заболеваемости плоскоклеточным раком (ПР) слизистой оболочки рта (СОР) и то, что выявление данной патологии в большинстве случаев происходит на поздней стадии заболевания, когда вероятность метастазирования увеличивается, изучение особенностей синтеза белка Gli-1 в процессе малигнизации эпителия СОР может способствовать подбору иммуногистохимических (ИГХ) маркеров для ранней диагностики ПР СОР. Цель данного исследования — изучить особенности локализации эффекторного белка Gli-1 сигнального пути SHH в зависимости от степени злокачественной трансформации эпителия СОР. Материал и методы: В работе использовали операционный материал отделения хирургической стоматологии (зав. — д.м.н. В.А. Семкин) и архивный материал лаборатории патологической анатомии (зав. — д.м.н., проф. И.И. Бабиченко) ЦНИИС и ЧЛX Минздрава РФ за период с 2010 по 2017 г. Были исследованы биоптаты СОР 43 пациентов (28 женщин и 15 мужчин), средний возраст которых был 64,2 года, с клиническим диагнозом лейкоплакии и ПР СОР. В 10(23,3%) случаях на основании гистологического исследования поставлен диагноз очаговой эпителиальной гиперплазии (ОЭГ) СОР, в 10(23,5%) случаях — диагноз плоскоклеточной внутриэпителиальной неоплазии (Squamous Intraepithelial Neoplasia — SIN). В 13(29,5%) случаях при морфологическом исследовании выявлен ПР СОР. В качестве контрольной группы были отобраны 10 случаев неизмененной слизистой оболочки с диагнозом фибромы СОР без воспалительных изменений и реактивных гиперпластических процессов (7 женщин и 3 мужчин; средний возраст — 61,7 года). Гистологическое и ИГХ-исследования биопсийного материала проводились в соответствии со стандартным протоколом. Тканевые антигены определяли с помощью мышиных моноклональных антител к Ki-67 (ММ1, «Diagnostic Biosystems») и кроличьих моноклональных антител к Gli-1 (EPR4523, «Epitomics»). Для визуализации антигенов использовали систему QUANTO на основе пероксидазы хрена и диаминобензидина. Индекс пролиферации (ИП) по Ki-67 определяли по отношению количества клеток с иммунореактивными ядрами к общему количеству клеток. Наличие белка Gli-1 оценивали по интенсивности окрашивания цитоплазмы клеток: 0 — реакции не отмечалось; 1 — слабое окрашивание; 2 — умеренное окрашивание; 3 — интенсивное окрашивание. Большая часть пролиферирующих клеток при ОЭГ и SIN локализована в нижних 2/3 эпителия, поэтому оценка экспрессии белков Ki-67 и Gli-1 проводилась в 300 клетках двух зон эпителия: 1-я зона — ростковая зона эпителия (мальпигиев слой), к которой относятся базальный слой и два лежащих выше ряда клеток, и 2-я зона — шиповатый слой эпителия. При ПР СОР выделены центральная и периферическая зоны опухоли. Периферическую зону ПР сравнивали с ростковым слоем в неизмененном эпителии при ОЭГ и SIN, а центральную зону ПР — с шиповатым слоем эпителия. Показатели определяли в соответствующих участках тканей. Подсчет клеток проводили при увеличении 400. Для количественной оценки результатов проводились морфометрические исследования. Статистический анализ осуществляли при помощи программы Statistica 10.0 в среде Windows 7; после исследования нормальности распределения данных по t-критерию Шапиро—Уилка достоверность различий для количественных признаков с нормальным распределением оценивали с использованием теста Стьюдента; при этом определяли среднее арифметическое (М) и стандартные отклонения (СД); разичия считали статистически значимыми при p<0,05. Достоверность признаков с ненормальным распределением устанавливали с помощью U-критерия Манна—Уитни, указывая при этом медиану (М0), 25-й и 75-й перцентили признаков (Q1; Q2); различия считали статистически значимыми при р<0,05. Корреляционные взаимоотношения между ИП клеток и синтезом белка Gli-1 оценивали с помощью коэффициента корреляции Спирмена. Результаты и обсуждение: Активная пролиферация клеток считается одной из основных характеристик опухолевого роста. Белок Ki-67 — универсальный маркер пролиферации клеток, так как выявляется в клетке во всех фазах митотического цикла, кроме Go. Показано, что в процессе малигнизации происходит увеличение пролиферативной активности эпителиальных клеток всех слоев СОР. В неизмененном эпителии и при ОЭГ пролиферация клеток всегда отмечалась только в ростковом слое (см. рисунок, а—д, на цветной вклейке). При SIN иммунопозитивные ядра пролиферирующих клеток, окрашенные в коричневый цвет (Ki-67), выявлены и в шиповатом слое эпителия (см. рисунок, ж, з). При ПР СОР активная пролиферация клеток происходит как в периферической, так и центральной зоне опухолевых образований (см. рисунок, к, л). Белок Gli-1 синтезируется в цитоплазме эпителиальных клеток, поэтому степень выраженности ИГХ-реакции оценивали по интенсивности окрашивания цитоплазмы клеток СОР. В неизмененных эпителиальных клетках синтеза белка Gli-1 не отмечалось (см. рисунок, в). При ОЭГ выявлены слабое окрашивание клеток мальпигиевого слоя и отсутствие ИГХ-реакции в шиповатом слое (см. рисунок, е). При SIN в ростковом и шиповатом слоях наблюдалась положительная ИГХ-реакция в цитоплазме клеток (см. рисунок, и). При ПР СОР в периферической и центральной зонах отмечалось наиболее выраженное окрашивание цитоплазмы опухолевых клеток (см. рисунок, м). Количественные показатели представлены в таблице. Как видно из представленных в таблице данных, эффекторный белок Gli-1 сигнального пути SHH в основном синтезируется в ростковом и шиповатом слоях при SIN и периферической и центральной зонах при ПР СОР. При исследовании корреляционных взаимоотношений в процессе трансформации клеток эпителия СОР в ПР в мальпигиевом слое и периферической зоне, а также шиповатом слое эпителия и центральной зоне установлена достоверная сильная положительная корреляция между пролиферативной активностью клеток по Ki-67 и синтезом белка Gli-1 (r=0,890, p<0,0001). Учитывая, что в раковых клетках отмечаются процессы самообновления, сходные с таковыми в стволовых клетках, можно предположить, что и механизмы регуляции регенерации этих клеток одинаковы. Изначально активация сигнального пути SHH была выявлена при дифференцировке стволовых клеток и тканевой регенерации. Недавно показано, что он принимает участие и в злокачественной трансформации эпителия при раке поджелудочной железы, раке легкого и раке пищевода. В данном исследовании установлено увеличение концентрации эффекторного белка Gli-1 при SIN и ПР СОР; выявлена также положительная и достоверная корреляционная связь между наличием белка Gli-1 в цитоплазме клеток и их пролиферативной активностью. Таким образом, повышение пролиферации клеток эпителия связано с активацией сигнального пути SHH. Сигнальный путь SHH участвует в регуляции процесса эпителиально-мезенхимальной трансформации, подавляя синтез белка межклеточной адгезии Е-кадгерина, что приводит к появлению в клетках N-кадгерина. Известно, что эпителиально-мезенхимальная трансформация является ключевым моментом инвазивного роста и метастазирования злокачественных опухолей. Поэтому активирование сигнального пути SHH может способствовать инфильтрирующему росту опухолевых клеток, формированию метастазов и неблагоприятному прогнозу. Таким образом, в проведенном исследовании эффекторный белок Gli-1 сигнального пути SHH выявлен в цитоплазме эпителиальных клеток только при SIN и ПР СОР. Обнаружена высокая корреляционная связь между пролиферативной активностью эпителиальных клеток и синтезом белка Gli-1, ввиду чего белок Gli-1 может быть использован в качестве маркера злокачественной трансформации клеток многослойного плоского эпителия СОР на ранних стадиях малигнизации.

Авторы:

Ивина А.А.
Семкин В.А.
Бабиченко И.И.

Издание: Стоматология
Год издания: 2018
Объем: 3с.
Дополнительная информация: 2018.-N 3.-С.4-6. Библ. 9 назв.
Просмотров: 46

Рубрики
Ключевые слова
bioVISION
in
ki-67
neo
sq
st
windows
адгезия
активация
активированного
активность
активные
анализ
анатомия
антиген
антитела
апоптоз
архивы
базальная
белковая
белковый
белок
биопсия
биоптат
большая
бытовые
вероятности
взаимоотношения
визуализация
внутриэпителиальные
возраст
воспалительные
выделение
высокий
гиперплазия
гиперпластического
гистология
года
групп
данные
данных
диагноз
диагностика
диаминобензидин
дифференцировки
днк
домен
железы
женщин
заболеваемость
заболевания
зависимости
здоровья
злокачественная
зона
зоны
изменение
изучение
иммунизация
иммуногистохимическое
иммунореактивный
инвазивная
индекс
интенсивная
интенсивность
инфильтрирующая
использование
использованием
исследование
исследования
качества
клетка
клеток
клеточная
клиническая
ключ
количественная
количество
контроль
контрольные
концентрация
коричный
корреляция
коэффициент
лаборатории
легкая
лежащий
лейкоплакия
локализации
локализованный
малигнизация
мальпигиевые
манна
маркер
материал
медицинская
медия
межклеточная
метастаз
метастазирование
метод
механизм
миграции
минздрав
митотическая
многослойный
молекулярная
момент
моноклональные
морфологическая
морфометрический
мужчин
мышиные
наличия
неблагоприятные
ненормальный
неоплазия
нижная
новообразования
нормальная
нормы
обнаружение
оболочка
образ
образование
общей
одного
окрашен
окрашивание
онкология
операционная
опухолевая
опухолей
основа
основание
основной
особенности
отделение
отклонение
отношение
отсутствие
оценка
очаговая
патологии
патологическая
пациент
передача
период
периферическая
пероксидаза
пищевод
плоские
плоскоклеточная
плоскоклеточный
повышение
подбор
поджелудочная
подобные
подсчет
поздние
показатели
положительные
полости
помощи
после
признаки
проведения
прогноз
программ
пролиферативная
пролиферация
пролиферирующие
протоколы
процесс
путей
пути
путь
работа
различие
различный
рак
рака
раковые
раннего
распределение
реактивное
реакцией
регенерация
регуляции
результата
рисунок
роль
роста
ростковый
ротовой
рта
ряда
связей
связывание
семей
сигнала
сигнальная
силлард
синтез
систем
слизистая
слова
слой
случаев
соматические
соответствие
соответствующие
состояние
способ
среда
среднего
стадии
стандартные
статистические
статистический
стволовых
степени
стоматологии
стоматология
таблицы
теста
тканевая
ткань
транскрипции
трансформация
увеличение
указ
умеренное
универсальное
условия
участие
участка
участники
фазовая
фиброма
формирование
функции
характеристика
хирургическая
хрена
цвет
цветная
цель
центральная
цикла
цинка
цитоплазма
часть
шапиро
шиповатый
экспрессия
эмбриональное
эпителиально-мезенхимальная
эпителиальные
эпителии
эффекторный
ядра
Ваш уровень доступа: Посетитель (IP-адрес: 18.97.14.86)
Яндекс.Метрика